Aurora-A在急性白血病中的表达

　　作者：田黎明　　作者单位：佳木斯大学附属第一医院血液科，黑龙江 佳木斯

　　【摘要】 目的：研究Aurora-A 在急性白血病骨髓细胞中的表达水平。方法：采用免疫组化法检测该酶在骨髓细胞中的水平。结果：30例急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia, AML)及30例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患者同17例正常人(normal，N)骨髓细胞比较，Aurora-A激酶表达有显著性差异(χ2=43.313，P<0.01)，在AML及ALL中表达率明显较正常人高。结论：Aurora-A激酶在急性白血病中呈高表达，因此它有望成为白血病治疗中的有效靶点及标志物。

　　【关键词】 Aurora-A激酶,急性白血病

　　Abstract:Objective:To study the expression level of Aurora-A kinase in the acute leukemia bone marrow cell.Methods:The Aurora-A kinase protein was observed by immunohistochemistry.Results:There were significant differences in Aurora-A kinase expression(P<0.01)when the the acute leukemia marrow cells from 30 cases of acute myelogenous leukemia ( AML) and 30 cases of acute lymphoblastic leukemia (ALL) were compared with normal bone marrow cells from 17 normals, with χ2=43.313.The expression rate of Aurora-A kinase in AML and ALL was higher than that in normal.Conclusion:Aurora-A kinase shows a high expression in acute leukemia marrow, and it might be adopted as a new marker and therapeutic target for acute leukemia。

　　Key words:Aurora-A kinase; acute leukemia ;significant difference

　　急性白血病作为临床常见的恶性肿瘤，在我国被列为十大高发性肿瘤之一，发病率为2.76/10万，与亚洲国家相近，稍低于欧洲国家水平。在恶性肿瘤死亡率中，白血病居第6位(男性)和第8位(女性), 在儿童及35岁以下成人中则居第1位。由于目前诊断手段的限制与白血病肿瘤标记物的特异性差,因此,新的肿瘤标记物和治疗靶点已成为基础研究者和临床医师关注的焦点。

　　Aurora激酶家族是一组丝/苏氨酸酶,是中心体调节、纺锤体形成、染色体分离,即细胞有丝分裂过程的主要调节者[1]。目前多项研究发现，Aurora-A做为该家族中的一员，在一些实体肿瘤如乳腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌和舌癌中出现高表达[2,3]，并且其表达水平与某些肿瘤的生物学行为有一定的相关性，对某些肿瘤的预后也有一定的预测作用。有关该酶在急性白血病患者骨髓中表达的研究至今少见报道，本研究采用免疫组化方法，检测急性白血病患者骨髓细胞中Aurora-A 激酶的表达是否较正常人骨髓中水平有明显差异性，为该病的分子靶点治疗和肿瘤标志提供临床依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 骨髓涂片的采集

　　所有患者骨髓涂片均来自佳木斯大学附属第一医院血液科及细胞室(其中有7例AML 和5例ALL 骨髓涂片为细胞室馈赠)，正常人骨髓涂片来自门诊健康体检者及无偿捐赠者，新鲜涂片经多聚赖氨酸防脱处理及4%多聚甲醛固定后置冰箱中待用。

　　1.1.2 临床资料

　　60例白血病中：AML和ALL各30例，男43例，女17例;年龄14～75岁，平均33.4岁;M0 1例，M1 3例，M2 1例，M3 13例，M5 7例，M6 1例，M7 4例，L1 13例，L2 5例，L3 12例(分类依据国际通用的法美英FAB法);初治18例，经治42例。

　　1.1.3 试剂采购

　　兔抗人Aurora-A多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,ABC免疫组织化学试剂盒及DAB染色剂购自武汉博士德生物技术有限公司。

　　1.2 方法

　　严格依照免疫组化试剂盒说明进行。

　　1.3 实验结果判定

　　免疫组化染色以细胞出现棕黄色颗粒为阳性，结果通过双盲法由两位有经验的病理专家独立评估，每张染色涂片随机选取10个高倍视野(×400)，每个视野计数100 个细胞。10个高倍视野阳性细胞平均百分率为阳性细胞百分率。没有阳性细胞赋值为0，<25%阳性细胞赋值为1，25%～50%阳性细胞赋值为2，51%～75%阳性细胞赋值为3，>75%阳性细胞赋值为4，染色程度标准根据每张涂片的大多数细胞染色特征决定，没有染色赋值为0，出现淡黄色颗粒赋值为1，出现黄色颗粒赋值为2，出现棕黄色颗粒赋值为3，最终结果由染色总数和染色程度共同决定。总值为0定为—，总值为1～2定为+，总值为3～4定为++，总值为5～6定为+++，总值为7定为++++。

　　1.4 统计学处理

　　应用SPSS15.0统计学软件处理数据，采用卡方检验，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　Aurora-A在急性白血病患者骨髓细胞中呈高表达，较正常人骨髓细胞差异显著(χ2=43.313，P<0.01)，见表1，LSD分析结果提示两两组间的均值均具有显著性，AML 阳性百分率明显大于ALL和正常骨髓。表1 Aurora-A在急性白血病及正常骨髓细胞中的表达(略)

　　3 讨论

　　Aurora-A(又称极光激酶A)是Aurora/Ip ll家族的成员之一[4]。Aurora/Ipll家族在细胞分裂的进程中起重要作用。根据各成员在细胞内的定位可分为3种，Aurora-A、Aurora-B、Aurora-C。Aurora-A 是该家族的一个重要成员，最早从乳腺癌组织中检测到，被称作BTAK(breast tumour activated kinase)又名Aurora2、AIK1(Aurora/Ipll kinase)、STK15(serine-threonine kinase 15)、STK6(serine/threonine kinase 6)、HsAIRK1(Aurora/Ipll related kinase)，该酶的编码基因定位于20q13,2，全长cDNA包含1209 kb的开放阅读框，有9个外显子，编码一种分子量为46 kD、403个氨基酸组成的丝氨酸和苏氨酸激酶[5]。Aurora-A定位于复制的中心体和细胞分裂期的纺锤体两极。以及中心体附近的微管区域[6]。其主要调节中心体分离及成熟，在G2向M过渡时，复制后的中心体分离并向细胞两极移动，形成双极纺锤体。在有丝分裂过程中,中心体是确保两极纺锤体的正确形成,染色体平均分配到子细胞的主要细胞器。Aurora-A的异常高表达引起细胞中心体的扩增,可以导致多极纺锤体的形成,并且干扰微管-动粒相互作用,进而破坏有丝分裂的正常进行,形成倍体性异常的细胞。因此,正常的细胞由此转变成恶性,这已被多个实验研究所证实[7]。本研究中急性白血病患者骨髓细胞中Aurora-A也呈高表达(>60%)，这同预期结果一致。那么，能否通过抑制其高表达而达到抑制或是治疗肿瘤目的呢，这是临床医师所关注的，Marumoto 等发现：RNA干扰或向HeLa细胞微注射Aurora-A抗体能够阻止中心体分离[8]。与此同时我们注意到在肿瘤细胞中，抑制Aurora-A导致有丝分裂检验点失活，多倍体产生，随后发生细胞凋亡;而在正常细胞中，抑制Aurora-A仅导致有丝分裂开始的延迟，并没有抑制有丝分裂[9]，由此可见，Aurora-A有可能成为急性白血病的有效靶点和肿瘤标志物，而抑制其高水平表达必将为急性白血病的治疗提供一条新途径。

　　【参考文献】

　　[1]Ke Y M,Dou Z,Zhang J,et al.Function and regulation Aurora/Ipl1p kinase family in cell division[J].Cell Re，2003,13(2):69

　　[2]Tanaka T,Kimura M,Matsunaga K,et al.Centrosomal kinase AIK1 is overexpressed in invasive ductal carcinoma of the breast[J].Clinic Cancer Res,1999,59: 20412044

　　[3]Li D,Zhu J,Firozi PF,et al.Overexpression of oncogenic STK15/BTAK/Aurora-A kinase in human pancreatic cancer[J].Clinic Cancer Res,2003,9:991997

　　[4]Anand S,Penrhyn-Lowe S,Venkitaraman AR.Aurora-A amplification overrides the mitotic spindle assembly checkpoint, inducing resistance to Taxol[J].Cancer Cell,2003,3:5162

　　[5]李国权,宫琳琳,邹丽娟,等.Aurora-A激酶与恶性肿瘤研究进展[J].国外医学,肿瘤学分册,2004,31(2):103106

　　[6]Glover DM,Leibowitz MH,McLean DA,et al.Mutations in Aurora prevent centrosome separation leading to the formation of monopolar spindles[J].Cell 1995,81:951

　　[7]Tanner M,Grenman S,Koul A,et al.Frequent amplication of chromosomal region 20q12-q13 in ovarian cancer[J].Clin Cancer Res,2000,6(5):18331839

　　[8]Hannak E,Kirkham M, Hyman A,et al.Aurora-A kinase is required For centrosome maturation in Caenorhabdit is elegans[J].Cell Biol,2001,155:11091116.