老年人外周血单核细胞表面HLADR和T淋巴细胞亚群的改变

　　作者：周静 周苏明 程蕴琳 作者单位：210029江苏省南京市，南京医科大学第一附属医院老年医学科

　　【摘要】 目的 通过对健康老年人与健康年轻人外周血单核细胞人类白细胞抗原(HLADR)和T淋巴细胞亚群表达水平的比较，探讨HLADR 和T淋巴细胞亚群的表达与衰老的关系。 方法 采用免疫荧光标记流式细胞技术测定20例健康老年人和20例健康年轻人外周血单核细胞HLADR和CD3、CD4、CD8的水平。 结果 老年组外周血单核细胞HLADR的表达稍高于年轻组，但统计学上差异不明显(P>0.05)，老年人CD4+T细胞、CD4/CD8低于年轻组，两者之间统计学差异明显(P<0.05或P<0.01)。 结论 老年组单核细胞HLADR 的表达稍高于年轻组，但功能降低，CD4+T 淋巴细胞和CD4/CD8 较年轻组下降，是老年人免疫功能减退的原因之一。

　　【关键词】 流式细胞术,人类白细胞抗原,DR T淋巴细胞亚群 老年人

　　【Abstract】　Objective To investigate the HLADR expression on monocytes and T lymphocyte cell subsets in the healthy old sample and adult individuals,and to discuss the correlative factors of HLADR and Tcell subsets in the aged. Methods The percentages of monocyte HLADR,and the levels of CD3,CD4 and CD8 were measured by flow cytometry in 20 normal old men and 20 healthy adults. Results HLADR expression on monocytes of the aged group was higher than that of the younger men,but there was no statistical significance(P>0.05).The levels of CD4,CD4/CD8 of the old man were obviously lower than those of the adults(P<0.05 or P<0.01). Conclusions The decline in immunological function of the aged is mainly due to the decreased CD4,CD4/CD8 and the decreased HLADR function though the HLADR expression is increased.

　　【Key　words】 flow cytometry; human leucocyte antigenDR; T lymphocyte cell subsets; aged

　　越来越多的研究表明老年人的免疫状态与个体的健康之间有着密切的关系。随着年龄的增长，人体的结构和功能都在发生变化。为此，本实验通过检测健康老年人及年轻人外周血单核细胞人类白细胞抗原(HLADR)和T淋巴细胞亚群的表达，对其中的机制进行探讨。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象 共有40名志愿者参加该试验，按年龄分为2组，年轻组共20例，其中男11例，女9例，年龄25～50岁，平均(37.3±7.70)岁;老年组20例，男16例，女4例，年龄60～87岁，平均(78.05±5.80)岁。参与者均排除有肿瘤、感染、自身免疫性疾病、糖尿病，近1年内未使用过任何影响免疫功能的药物者。

　　1.2 方法 所有志愿者均为空腹8 h以上抽晨血1 ml(肝素钠抗凝)，采用Becton Dickinson 公司的流式细胞仪FACSCalibur 和Cell Quest软件进行三色荧光参数获取及分析。试剂购自BioLegend公司,antihCD14 PE,antihHLADR PE/Cy5，antihCD3 FITC, antihCD4 PE,antihCD8 PE/Cy5，严格按照说明书操作。

　　1.3 统计学处理 所有数据均以均数±标准差表示，应用Microsoft Excel函数进行统计学分析，组间均数比较采用t检验，P<0.05为有统计学差异。

　　2 结果

　　2.1 2组外周血单核细胞HLADR检测结果比较 HLADR在绝对数值上较年轻组有所增加，但统计学上无明显差异(P>0.05)。见表1。表1 2组外周血单核细胞HLADR变化比较(±s，%)

　　指标年轻组(n=20)老年组(n=20)HLADR67.59±11.9073.77±15.16HLADR+CD14+56.15±14.2860.54±16.43

　　2.2 2组T淋巴细胞亚群检测结果比较 老年组CD4+T细胞、CD4/CD8较年轻组明显降低，2组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表2。表2 2组外周血T淋巴细胞亚群变化比较 注：与年轻组比较，*P<0.05，**P<0.01

　　3 讨论

　　人类白细胞抗原(HLA)是人类的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)，由一组紧密连锁的等位基因组成，其基因是人类基因组中最复杂、最具多态性的遗传系统[1]，全长约4×106 个碱基，目前已确认了200多个基因座位，其中有半数以上基因产物被确定具有免疫功能，因此，HLA系统在人类免疫系统中起重要作用，长期以来被认为是多种疾病的基因危险信号。MHCⅡ类分子主要分布在树突状细胞、巨噬细胞、激活的T细胞、成熟B细胞表面，即抗原递呈细胞(antigen presentation cell,APC)的表面，和CD4+ T细胞(也称为辅助性T细胞，TH细胞)相互作用，诱导特异性的细胞毒性T细胞的产生，或激活B淋巴细胞,促进其分化为浆细胞,产生特异性的抗体,以清除病原微生物的入侵。HLADR即在此Ⅱ类分子的基因区内，HLADR在抗原递呈过程中，MHC限制性方面起重要作用。同时，细胞上表达HLADR是细胞被激活的标志[2]。近年来，许多研究探讨了HLADR与感染、肿瘤、自身免疫性疾病等的关系，表明单核细胞上HLADR表达的减少是创伤、烧伤、术后感染、外科手术应激、菌血症和脓毒血症等感染性疾病危险度增加及多器官功能衰竭出现的一种早期的预后指标。而随着年龄的增长，感染、肿瘤、自身免疫性疾病的概率随之增加，体液免疫、细胞免疫反应也随之改变[3]。那么，HLADR 随着增龄，其变化究竟如何?本试验的结果提示，健康老年人与健康年轻人表达CD14的单核细胞表面HLADR 的表达，虽在统计学上无明显差异，但从数值上看，健康老年人的表达要高于健康年轻人。曾有法国学者[4]也观察了年龄对外周血单核细胞和淋巴细胞上HLA表达的影响情况,结果提示,随着年龄的增加,表达HLADR的T细胞比例是增加的,但表达在每个T淋巴细胞上的HLADR分子数量则是减少的;而意大利的Ginaldi等[3]则对20例82～100岁健康老年人和15例25～50岁健康成年人进行了对照研究，其结果表明，老年人群中，细胞表面表达HLADR这一激活标志的CD3+ 淋巴细胞的比率是增加的，但被激活的CD3+淋巴细胞膜表面的HLADR的平均荧光强度则显著低于年轻人。这两位学者的试验与本试验均选取的都是健康老年人，排除了疾病的干扰，反映了年龄与HLADR的相关性。这些试验结果均证实了老年人表达HLADR的免疫细胞(T淋巴细胞和单核细胞)的比例与年轻人相比是增加的，但表达HLADR的免疫细胞的功能在激活过程中存在着异常，这可能就是老年人免疫功能下降的主要原因之一。

　　T淋巴细胞介导的细胞免疫在机体免疫方面起着核心作用。T细胞亚群中CD3是所有T细胞的表面标志，是机体细胞免疫的基础;CD4是TH细胞和效应T细胞的表面标志，TH 细胞通过释放多种细胞因子辅助B细胞和效应T细胞活化，上调机体的免疫功能;CD8抗原是细胞毒T细胞和抑制T细胞( TS)的表面标志;CD4 /CD8可直接反映宿主T淋巴细胞亚群的紊乱状态,且在一定程度上可间接了解机体细胞免疫功能情况[5]。本试验结果显示，健康老年人所测得的CD3+、CD8+细胞的数值同年轻人之间没有明显差异，但CD4+T细胞和CD4/CD8的比值明显低于年轻人，两者比较统计学上有明显差异。关于这方面的研究，国内外的报道不尽相同[67]，但从总体趋势看，与本试验的结果基本一致。随着年龄的增长，老年人CD4+T细胞、CD4/CD8比值明显低于年轻人，提示老年人免疫功能的下降也可能与此相关。综上所述，随着年龄的增长，老年人细胞免疫功能明显下降，不管是抗原递呈功能，还是细胞的杀伤功能均显著减弱，继而抗感染能力和清除病原体的能力下降，感染、肿瘤、自身免疫性疾病的概率随之增加，因而，从这方面着手，设法提高老年人的细胞免疫功能，对提高老人的抗感染、抗肿瘤能力将会起一定的作用。

　　【参考文献】

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　　[4] Le Morvan C, Cogné M, Troutaud D, et al. Modification of HLA expression on peripheral lymphocytes and monocytes during aging[J]. Mech Ageing Dev,1998,105(3):209220.

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　　[6] Huppert FA, Solomou W,O' Connor S, et al. Aging and lymphocyte subpopulations: whole blood analysis of immune markers in a large population sample of healthy elderly individuals[J]. Exp Gerontol,1998,33(6): 593600.

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