去除白细胞对新鲜冰冻血浆炎性细胞因子和凝血因子生物活性的影响

　　作者：刘寓,王娟,杨均　　　作者单位：郧阳医学院附属人民医院1输血科;2检验科,湖北 十堰 442000

　　【关键词】 白细胞,炎性细胞因子,凝血因子,输血反应

　　异体供者血液中的淋巴细胞可引起受血者HLA(人类白细胞抗原)系统产生免疫应答，从而导致不良反应。研究证实：90%以上的输血副反应与白细胞相关，且非溶血性发热反应的发生率与白细胞残留量呈正相关，而从方法学的发展趋势来看，过滤法去除白细胞是目前最有效的方法[1]。本研究通过测定过滤法去除白细胞前后新鲜冰冻血浆细胞因子和凝血因子的变化，探讨白细胞过滤血浆在临床的应用价值和安全性。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　从市中心血站提供的200 mL袋规格新鲜冰冻血浆中随机选取A型、B型、O型及AB型各10袋，合计40袋。

　　1.2 仪器与试剂

　　1.2.1 仪器：STA Compact全自动血凝仪;KHB ST360酶标仪;HITACHI7600全自动生化分析仪;去白细胞输血器(南京双威实业公司生产FTSRC201型一次性滤除白细胞输血器);PHⅡ型恒温循环解冻箱;KJJ600型空气消毒器。

　　1.2.2 试剂：凝血因子测定试剂由法国STAGO公司提供;细胞因子IL1β、IL2、IL6、TNFα与IFNγ的测定试剂由深圳晶美生物工程有限公司提供;血浆蛋白测定试剂由HITACHI公司提供。

　　1.3 方法

　　将选取的冰冻血浆置于37 ℃恒温循环解冻箱中完全解冻后，在超净工作室内严格按照无菌技术要求和去白细胞输血器操作说明进行血浆去白细胞过滤处理，白细胞去除率99.9%，残留量1×106。每袋血浆于过滤前后各留取血浆样本5 mL，严格按照仪器和试剂说明书测定其细胞因子、凝血因子和血浆蛋白的含量。

　　1.4 统计学处理

　　实验数据采用SPSS 13.0统计软件分析处理，所有数据均以x±s表示，两组计量资料的比较采用配对资料t检验，P0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 去白细胞过滤前后新鲜冰冻血浆凝血因子及血浆蛋白含量的比较

　　新鲜冰冻血浆过滤后，其血浆蛋白TP、ALB含量和TT、FIB、FⅡ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C活性无显著影响(P0.05);而APTT、PT结果则较过滤前延长，差异有统计学意义(P0.05),但各项测定值均维持在正常参考值水平内，见表1。表1 去白细胞过滤前后新鲜冰冻血浆凝血因子及血浆蛋白测定结果注：与过滤前比较△P0.05

　　2.2 去白细胞过滤前后新鲜冰冻血浆炎性细胞因子含量的比较

　　新鲜冰冻血浆过滤前后相比较，其炎性细胞因子IL1β、IL2、IL6、TNFα与IFNγ的含量显著降低，见表2。表2 去白细胞过滤前后新鲜冰冻血浆炎性细胞因子测定结果注：与过滤前比较P0.01

　　3 讨论

　　输血不良反应主要是由受者体内HLA抗体与输入的供血者白细胞相互作用而产生的供-受体间抗原抗体反应。由于人类HLA差异巨大，不同个体之间几乎没有完全相同的HLA，当异体血液中的白细胞输入人体后，即与受者发生同种异体反应而产生白细胞抗体引起受体发生免疫反应，从而导致如非溶血性发热性输血反应(FNHTR)、HLA同种免疫、输血相关移植物抗宿主病(TAGVHD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、亲白细胞性病毒传播及潜伏病毒的激活、输血相关免疫抑制等输血不良反应。因此，血浆中残存的白细胞是一种有害的污染物，应予以去除[1]。近年来，随着分子生物学的巨大进步和输血研究的深入，Lin等发现血浆中白细胞所分泌的IL1β、IL2、IL6、IFN γ等炎性细胞因子的含量与NHFTR和GVHD等的发生率呈显著正相关，TNF则可诱导IL1、IL6、IL8、IFNγ等的产生，介导内毒素休克和炎症反应，还可介导细胞凋亡的效应等。FNHTR的发生可能是由于白细胞释放的炎性因子作为内生性致热原，诱导前列腺素释放，作用于下丘脑而使受血者体温升高[2-3]。

　　输注新鲜冰冻血浆(FFP)主要是为了补充患者体内的凝血因子，从而达到止血的目的。但目前临床使用的FFP中多残存有一定量的白细胞成分，日本学者研究数据显示目前血液中心提供给临床的成份血液制剂中每袋血浆制品的白细胞含量仍可达105～107[4]。Strauss等[5]的研究证实，对白细胞抗原的同种免疫发生率约为39%(20%～71%),诱发HLA同种免疫的白细胞阈值为5×106U，白细胞数≤1×106U时才可排除输血感染CMV，因此使用少白细胞FFP可显著降低HLA同种免疫并降低输血副反应的发生率[6]。

　　目前，去除血液成分中的白细胞有多种方法，如细胞洗涤法(白细胞去除率为80%)、梯度离心法(白细胞去除率为65%～88%)、冰冻法(白细胞去除率为95%)、右旋糖酐沉降法(白细胞去除率为82%～95%)、单采法以及过滤法等。其中最为简单、易行、有效的是用白细胞滤器过滤法制备去白细胞血液(白细胞清除率达99.9%以上)[6]。实验显示：使用白细胞滤器对新鲜冰冻血浆进行过滤后，PT、APTT测定值虽有所延长，具有治疗价值的凝血因子FIB、FⅡ、FⅧ、FⅨ的活性和血浆蛋白含量均不受显著影响，且均在卫生部《血站基本标准》的允许水平内;而导致HLA同种免疫输血副反应的的炎性细胞因子IL1β、IL2、IL6、TNFα与IFNγ则得到有效清除，是一种安全有效的血液制品。新鲜冰冻血浆输注前进行去白细胞过滤处理，有助于减少不良反应的发生。

　　【参考文献】

　　[1]张 凌,刘 珺,周 菁.去白细胞输血的临床意义及应用进展[J].北京医学,2004,26(3)194-196.

　　[2]Lin JS,Tzeng CH,Hao TC,et al.Cytokine release in febrile nonhaemolytic red cell transfusion reactions[J].Vox Sang,2002,82(3)156-160.

　　[3]夏云金,万楚成,程范军,等.肝细胞生长因子对异基因骨髓移植小鼠血清TNFα、IFNγ、IL4水平的影响[J].郧阳医学院学报,2005,24(1)1-3.

　　[4]刘景汉,韩 玮,董 军,等.输注去白细胞血液对提高医疗质量的作用[J].中国医师杂志,2004,6(1)39-40.

　　[5]Strauss RG.Leukocytereduction to prevent transfusiontransmitted cytomegalovirus infections[J].Pediatr Transplant,1999,3(9)19-22.

　　[6]聂慧芳,周克礼,张 鹏,等.血站型去白细胞血液制品的应用[J].中国输血杂志,2006,19(2)130-132