中性粒细胞碱性磷酸酶染色在血液病诊断中的应用

作者:黄湘宁

 作者单位：广州新海医院检验科，广东广州 510300

    【摘要】  　　目的 探讨中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色在血液系统疾病患者诊断与鉴别诊断中的应用意义。 方法 对366例血液系统疾病患者的血涂片用改良戈氏钙钴法进行染色并作积分判断，并以30例健康体检者作正常对照。结果 急性髓细胞白血病（AML）、慢性粒细胞白血病（CML）慢性期和加速期、巨幼细胞贫血患者的NAP阳性率和积分均明显低于正常对照组(P<0.01)；而急性淋巴细胞白血病（ALL）、骨髓增殖性疾病MPD、再生障碍性贫血（AA）、淋巴瘤白血病期、慢性淋巴细胞性白血病（CLL）、多发性骨髓瘤（MM）、类白血病患者的NAP阳性率和积分则明显高于正常对照组(P<0.01)，且以类白血病者最高；CML急变期、嗜酸细胞增多症、骨髓增生异常综合症（MDS）者与正常对照组比较则差异无统计学意义(P>0.05)。结论 根据NAP活性的特性在很多血液疾病中都可以把其作为诊断及鉴别诊断的判断指标。

【关键词】  碱性磷酸酶；中性粒细胞碱性磷酸酶染色；血液病；诊断

　　中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是一种能水解磷酸脂的水解酶，在中性粒细胞中含量最多，随着细胞的成熟，酶的活性也逐渐增强。在病理情况下，NAP活性的变化常有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。本文通过对366例血液系统疾病患者NAP活性观察，进行对比分析，以探讨其在血液系统疾病诊断和鉴别诊断中的应用意义。
   
　　1  对象和方法
   
　　1.1  对象
   
　　选择笔者进修医院（广东省人民医院）2005年度收治的血液系统疾病患者366例，全部病例依据骨髓穿刺涂片细胞学检查、骨髓活检病理检查及有关实验室检查并结合临床参照文献确诊［1］。其中男199例，女167例。病种：急性髓细胞白血病（AML）98例，急性淋巴细胞白血病（ALL）41例，慢性粒细胞白血病（CML）慢性期、加速期、急变期分别27、7、27例，骨髓增殖性疾病(MPD) 19例，骨髓增生异常综合症（MDS）35例，再生障碍性贫血（AA）32例，淋巴瘤白血病期10例，巨幼细胞贫血4例，慢性淋巴细胞性白血病（CLL）10例，多发性骨髓瘤（MM）32例，嗜酸细胞增多症18例，类白血病6例。以患者新鲜末梢血制备血涂片。另取30例（男20例，女10例）健康体检者的血涂片作正常对照。
   
　　1.2  试剂及仪器

　　1.2.1  试剂  95%乙醇（用无水乙醇新鲜配制）；基质：30g/L甘油磷酸钠10mL，20g/L巴比妥钠10mL，20g/L氯化钙（干燥）10mL，20g/L硫酸镁2mL，蒸馏水20mL，混合后用1mol/L氢氧化钠校正至pH9.4；20g/L硝酸钴；20g/L硫化铵（新鲜配制）；5g/L伊红。

　　1.2.2  仪器  显微镜，37℃恒温水浴箱，电子计数器，电子计时钟。
   
　　1.3  细胞染色
   
　　采用改良Gomori氏法：将血涂片用新鲜配制的95%乙醇固定10min，蒸馏水轻洗，待干；基质液按上述方法配好后（以精密PH试纸测pH 9.4～9.6）放37℃恒温水浴箱30min，再将固定好的血片置基质中温浴5h以上；取出后在蒸馏水中轻洗，自然干燥后放入20g/L硝酸钴中5min；蒸馏水轻洗，自然干燥后放入20g/L硫化铵5min；流水冲洗，干燥后置5g/L伊红复染5min，自来水冲洗，待干燥后镜检。

　　1.4  记录方法
   
　　显微镜油镜观察100个中性粒细胞，以阳性率、积分记录结果。
   
　　1.5  统计学处理
   
　　数据以±s表示，多组与对照组间的比较采用Dunnettt检验，组间的两两比较采用方差分析及q检验。

2  结果
   
　　2.1  正常健康人群NAP阳性率和积分的测定
   
　　本组正常健康人群中男性的NAP阳性率为25.0%，积分为37.5；女性NAP阳性率为28.0%，积分为40.2。对正常健康人群中男性和女性NAP阳性率和积分结果进行比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
   
　　2.2  各型血液系统疾病的NAP阳性率和积分与对照组的比较  
   
　　AML、CML慢性期和加速期、巨幼细胞贫血患者的NAP阳性率和积分均明显低于正常对照组(P<0.01)；而ALL、MPD、AA、淋巴瘤白血病期、CLL、MM、类白血病患者的NAP染色阳性率和积分则明显高于正常对照组(P<0.01)，且以类白血病者最高。
   
　　CML急变期、嗜酸细胞增多症、MDS者与正常对照组比较则差异无统计学意义(P>0.05)。
   
　　表1  各型血液系统疾病的NAP阳性率和积分与对照组的比较（略）

　　与正常对照组比较，除* P>0.05, 其余P<0.01。
   
　　3  讨论
   
　　NAP是中性粒细胞的标志酶，主要存在于成熟中性粒细胞内，是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件（pH9.3～9.6）能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。NAP活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能，当中性粒细胞活化后，NAP阳性率及积分升高［2］。
   
　　本组急性白血病中，AML患者的NAP积分值减低，ALL者则增高，这可作为急性白血病类型的鉴别［3］。CML慢性期和加速期患者的NAP积分均明显低于正常对照组；而MPD组明显高于正常对照组。有文献报道［4］细胞特异性激酶p55cfgr可反映中性粒细胞的成熟度，故NAP活性可能与之有关。有作者认为，其机制是CML患者的特异性激酶p55cfgr呈下调状态，而其他MPD患者的特异性激酶p55cfgr上调。另就CML不同各期比较，NAP积分减低或为零是CML慢性期的特点；CML急变期在无感染和未用皮质激素时，NAP积分从原来的减低或缺如转为正常或增高。
   
　　其他血液病中，淋巴瘤白血病期、CLL、AA、MM等患者的NAP活性增高，类白血病者的NAP活性则极度增高。另有嗜酸细胞增多症时NAP活性与正常对照无明显差异，可能嗜酸细胞增多常与病毒感染有关，而病毒感染时NAP活性在正常范围或偏低［3］。本文4例巨幼细胞贫血患者NAP活性均明显减低，与该疾病为营养缺乏所致细胞成熟障碍性疾病相符，但例数偏少，统计学意义不大。
   
　　综上所述，NAP活性观察对血液系统疾病的诊断与鉴别诊断有非常重要的意义。

【参考文献】
  　　［1］ 姚尔固，林凤茹，郭晓楠，等.恶性血液病的诊断与治疗 ［M］. 北京：人民军医出版社，2004：1.

　　［2］ 丛玉隆，冉宝春，邓新立，等.中性粒细胞碱性磷酸酶在传染性非典型肺炎诊断与鉴别诊断中的价值［J］.中华检验医学杂志，2005，28（1）：3436.

　　［3］ 陈文彬.诊断学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：11.

　　［4］ 曹鹏飞，刘友生，柳永和.中性粒细胞碱性磷酸酶在骨髓增生性疾病诊断及疗效观察中的价值［J］.白血病·淋巴瘤，2006，15（6）：437.