Fas及FasL在胃癌组织非典型增生组织和正常胃粘膜中表达研究

作者：黄述斌
作者单位：安徽省池州市人民医院病理科， 安徽 池州 247100
 
【摘要】  目的： 探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL在胃癌发生、发展中的作用。方法: 应用免疫组化（S-P法）检测Fas、FasL蛋白在胃癌组织、癌旁非典型增生组织中的表达，并应用缺口原位末端标记（TUNEL染色）检测上述组织中的细胞凋亡指数（AI）。结果: Fas、FasL在胃癌及非典型增生组织中的表达显著高于正常胃粘膜（P<0.01）,正常胃粘膜组织的凋亡指数显著低于非典型增生组织（P<0.01）和胃癌组织（P<0.05）。结论: Fas、FasL的异常表达可能是胃粘膜癌变过程中细胞凋亡抑制的重要机制之一，并与胃癌的免疫逃逸有关。
【关键词】  胃癌 凋亡 Fas FasL
　　The Study of the Expession of Fas and FasL Protein in Gastric Carcinoma Tissues Side-carcinoma Dysplasia Tissues and Normal Gastric Mucous Membrance
　　HUANG Shu-bin,  LIU Zhen-hong,  JIN Xiao-ping,  et al
　　(Chizhou People's Hospital, Anhui Chizhou 247100,China)
    Abstract：Objective: To study the relationship between the expression of Fas and FasL protein and the pathogenosis and development of gastric carcinoma. Methods: The expression of Fas and FasL protein were detected by S-P immunohistochemistry technique . The apoptosis indexes(AI) examed by TUNEL methods. Results: The expression of Fas and FasL in gastric carcinoma tissues and side-carcinoma dysplasia tissues are remarkably higher than that in normal gastric mucous membrance (P<0.01), The apoptosis indexes of normal gastric mucous membrance are remarkably lower than that of gastric carcinoma tissues (P<0.05) and side-carcinoma dysplasia tissues (P<0.01). Conclusion: The abnormal expression of Fas and FasL may be involved in the pathogenesis and the immune escape of gastric carcinoma.
    Key words:  Gastric carcinoma;   Apoptosis;   Fas;   FasL
    胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，占全身恶性肿瘤的第三位，是严重危害人类健康的疾病。其发病机制尚不十分清楚。随着分子生物学和细胞生物学的研究进展，人们越来越多的认识到胃癌等恶性肿瘤是与基因密切相关的一类疾病。尤其自细胞凋亡理论提出以来，细胞凋亡障碍与肿瘤发生之间的关系成为学者们研究的热点。我们采用免疫组化方法检测正常胃粘膜、胃癌旁非典型增生和胃癌中Fas及FasL表达，旨在探讨凋亡及其信号转导系统在胃癌发生与发展过程中的作用。
　　1  材料与方法
　　1.1  材料：选取承德医学院附属医院1993～1998年随访资料完整的胃癌手术存档75例，选择带有癌旁组织的蜡块，男性48例，女性27例，平均年龄56.5+2.16岁（39～74岁）其中高分化腺癌（管状腺癌、乳头状腺癌）18例，中-低分化腺癌（包括未分化癌）54例，粘液癌3例。术前均未作任何化疗或放疗，正常胃粘膜（指没有萎缩、肠化、非典型增生，且固有层中只有轻微慢性炎细胞浸润的胃粘膜）10例作为对照，全部病例均作5μm连续切片。
　　1.2  检测方法：免疫组化采用( S-P)法，一抗为鼠抗Fas（FasL），免疫组化试剂盒及TUNEL试剂盒购自武汉博士德公司。
　　1．3  免疫组化结果判断：根据Fas及FasL阳性产物着色深度和分布范围分二级；I级（－）：无阳性靶细胞。II级（+）：＞25%靶细胞强阳性或大多数靶细胞呈弱阳性。
　　1.4  TUNEL染色结果判断：阳性细胞表现为核内密集分布深棕黄色颗粒，随机读取1000个细胞（不少于5个高倍镜视野，取阳性细胞数/总细胞数×100%为凋亡指数)。

2  结果
　　2．1  癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织中Fas及FasL的表达  Fas蛋白阳性产物位于细胞膜、细胞质中，FasL阳性产物分布于细胞质内。在正常胃粘膜主要分布在腺体上部，以表层上皮为主，在癌旁的非典型增生区域，阳性细胞在腺体内呈灶状分布，在胃癌组织中呈散在分布。胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织中Fas及FasL表达阳性率的变化见表1。由表1可见，Fas在胃癌和癌旁组织的阳性率均显著高于正常胃粘膜组织（P<0.05）,FasL在三种组织中的表达无显著性差异 (P>0.05)。
　　表1  胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织中Fas及FasL表达阳性率的变化（略）
　　*与正常胃粘膜相比P<0.05
 　　表2  胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜的凋亡指数（AI）（略）
　　**与正常胃粘膜相比 P<0.01,*与正常胃粘膜相比 P<0.05，***为非典型增生组织
　　表3  胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜中FasL的表达与AI的关系（略）
　　**与阴性组相比P<0.01, *与阴性组相比 P<0.05
　　表4  胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜中Fas表达与AI的关系（略）
　　* P<0.05
　　2．2  胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织中细胞凋亡指数的变化TUNEL染色为核着色，凋亡细胞核为深棕黄色。胃癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织中细胞凋亡指数的变化见表2。TUNEL染色结果显示，凋亡指数在癌组织中明显高于正常胃粘膜（P<0.01）而在非典型增生中，则显著低于正常胃粘膜（P<0.05），FasL阳性组的凋亡指数较FasL阴性组显著升高(P<0.05)，结果见表3。Fas阳性组的凋亡指数较Fas阴性组显著升高(P<0.05)，结果见表4。

　　3  讨论
   
　　细胞凋亡是有基因调控的细胞主动死亡过程,是细胞自稳平衡(homeostasis)机制对内外刺激因素的主动应答反应，是借助“细胞丢失，正常细胞更新，病理情况下清除异常或非法身份细胞”的生理平衡，是机体自稳的重要机制之一。大量的研究表明，凋亡受抑在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。凋亡的发生是经过一系列信号转导实现的，在这一复杂通路中，Fas蛋白及其配体被认为在凋亡的诱导阶段起重要作用［1］ 。
    
　　Fas蛋白是I型跨膜蛋白分子量45KD，属于肿瘤坏死因子受体超家族成员；FasL则是肿瘤坏死因子超家族成员，分子量40KD，现已证实，Fas系统在介导细胞凋亡过程中可能起着重要的信号传递作用：当Fas与FasL与之浆体形成结合，可诱导表达Fas的细胞发生凋亡［2，3］。
    
　　研究证实，Fas与FasL在肝癌［4，5］、肺癌［6,7］、宫颈癌［8］，膀胱癌［9］等多种肿瘤中均有表达，在对胃癌的研究中也有报道，但结果不尽相同［10,11］。本实验结果显示，在胃癌组织及癌旁典型增生组织中Fas蛋白表达显著高于正常组织，而且与肿瘤的分化程度有关，这提示，Fas蛋白可能参与了胃癌形成，结合TUNEL染色结果表明，并非所有Fas阳性的细胞均表现出凋亡，相反，在癌旁组织中的凋亡指数低于正常胃粘膜，这说明，在胃癌的发生早期，除了有过度增生，还存在着凋亡受抑。本试验结果中胃癌组织中Fas表达与凋亡指数不符，可能是机体自我保护功能的体现［12］。也可能是癌细胞在生长过程中对Fas介导的凋亡有抵抗作用，可以逃避凋亡［13］ ，这也提示我们，Fas／FasL可能参与肿瘤细胞的免疫逃逸，因此，癌组织中虽有Fas的高表达，但凋亡指数并未升高。关于胃癌细胞抵抗凋亡的机制尚有待进一步研究。
    
　　FasL在胃癌、癌旁组织及正常粘膜中均有表达，差异无显著性，但FasL阳性病例较FasL阴性病例凋亡指数升高，差异有显著性。关于FasL参与凋亡的详细机制以及Fas与FasL的比值与凋亡指数的关系还有待进一步研究。

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