核因子-κB与IL-10在慢性阻塞性肺疾病中的作用

　　慢性阻塞性肺疾病是一种常见的慢性呼吸系统疾病，以气流受限为特征，炎性反应是其主要的发病机制。NF-κB是一个多功能转录因子，具有广泛的生物学活性，激活后可促进细胞因子、黏附因子及趋化因子等的转录，在炎性反应中起重要作用， NF-κB以直接或间接的方式参与COPD肺部炎性反应与免疫反应。本研究旨在探讨NF-κB、IL-10在AECOPD炎性反应中的作用及两者的关系，以及糖皮质激素抑制AECOPD气道炎性反应的可能途径。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择我院AECOPD住院患者60例为研究对象，男32例，女28例，年龄45～78岁，平均(64±11.8)岁。其中轻—中度30例，重—极重度30例，对重—极重度患者在基本治疗基础上加用糖皮质激素治疗，入院后予以地塞米松10 mg/d静脉推注2 d后改为口服泼尼松30 mg/d，逐渐减量至停药疗程共10 d，治疗后该组患者咳嗽、咯痰、气短症状改善，血气分析无呼吸衰竭纳入研究对象。所有患者均排除其他心肺疾病、肝肾功能障碍、糖尿病。AECOPD诊断及分组据中华医学会呼吸分会慢性阻塞性肺疾病学组制定的《COPD诊治指南》[1]。另选择同期门诊健康体检者30例为对照组。 1.2 试验方法 1.2.1 标本收集：各组患者清晨空腹采血8 ml于无菌抗凝管中- 4℃保存。 1.2.2 外周血单个核细胞NF-κB的检测：将已采集的各试验对象外周血标本各取5 ml，提取单个核细胞进行活细胞计数，并提取核蛋白，并用SDS-PAGE法进行蛋白分离，后将蛋白转移至 PVDF膜上，用含5%脱脂牛奶的封闭液封闭膜37℃过夜，一抗 37孵育1 h，TBST充分洗涤膜后二抗孵育1 h，TBS洗涤后用ECL试剂显色。暗室曝光，X光自动洗片机洗片，对扫描的图像进行分析，通过计算每次电泳的NF-κB p65及β-action条带灰度值相比，计算出 NF-κB p65/β-action的灰度值比。 1.2.3 外周血IL-10的检测：各组试验对象外周血IL-10含量运用 ELISA法检测。 1.2.4 肺功能检测：采用肺功能检测仪(HP Deskjet 3748)测定各试验组患者入院时FEV1占预计值以及FEV1/FVC的值。 1.3 统计学处理：使用SPSS 13.0对各项资料进行统计、分析，各项参数以均数±标准差(x ± s)表示，采用t和χ2检验，以P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

试验组与对照组NF-κB、IL-10的表达见表1。轻—中度组、重—极重度组NF-κB、IL-10的表达见表2。糖皮质激素治疗前与糖皮质激素治疗后重—极重度组NF-κB、IL-10表达见表3。 COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量与IL-10含量呈负相关，其含量随IL-10含量增加而减少(r=-0.78，P<0.05); COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量与患者肺功能呈负相关，其含量越高，肺功能越差(r=-0.97，P<0.05);糖皮质激素治疗后重—极重度COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量明显减少，IL-10含量明显增加，其变化差异均有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

慢性阻塞性肺疾病是慢性气道炎性反应性疾病，气道炎性反应是其主要发病机制，支气管黏膜下病理显示：中性细胞、单核-巨噬细胞、淋巴细胞等炎性反应细胞参与COPD的发病过程[2]。 NF-κB是NF-κB/Rel家族的一员，该家族在炎性反应和免疫损伤中起着非常重要的作用，能够调节多种细胞因子、趋化因子和抗调亡蛋白等基因的转录功能，当其激活后能引起多种基因表达的改变将会导致炎性反应性疾病和肿瘤的发生[3]。有研究者对吸烟者和COPD患者气道黏膜活检发现，气道上皮细胞中NF-κB p65阳性表达明显增加，其与疾病的严重程度相关[4]。作为一种内源性抗炎因子，抑制和降低炎性反应是IL-10的主要作用。机体在遭受外界刺激时它可以降低机体多种炎性反应因子的产生、降低炎性反应对机体的损伤。IL-10降低及其调控分泌的促炎因子的增加可能是气道持续炎性反应并导致气道重塑、气流受限，肺组织破坏及肺气肿等病理过程的重要机制。但COPD患者体内 NF-κB与IL-10的相关性研究目前较少。 COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量与IL-10含量呈负相关;COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量与患者肺功能呈负相关;糖皮质激素治疗后重—极重度COPD急性加重期患者外周血中NF-κB的含量明显减少，IL-10含量明显增加;其变化差异均有统计学意义(P<0.05)。本研究表明，NF-κB 参与AECOPD气道炎性反应，是AECOPD的重要致炎因子， NF-κB水平越高，AECOPD炎性反应越重，气流受限越明显。 IL-10有抑制AECOPD炎性反应的作用，通过抑制NF-κB的表达实现。糖皮质激素通过抑制NF-κB，促进IL-10的表达，抑制气道炎性反应。炎性反应是COPD的重要发病机制，炎性反应损伤可导致多种炎性细胞激活炎性反应介质、细胞因子等从而提高中性粒细胞在炎性反应部位的结合能力，增强白细胞的黏附与移行促进炎性反应的发生[5-6]。目前COPD患者的治疗主要是针对抗感染，解痉等的对症治疗，对COPD的气道炎性反应本质无明显改善。若能从干预NF-κB、IL-10的表达水平抑制COPD急性加重期患者气道的炎性反应，不失为一种有效的治疗方法。糖皮质激素已经广泛应用于临床抑制AECOPD患者气道炎性反应，其抑制气道炎性反应的作用可能通过能抑制NF-κB表达及促进IL-10的表达实现。 4 参考文献

[1] 中华医学会呼吸病学会慢性阻塞性肺疾病学组.COPD诊治指南(2007年修订版)[J].中华呼吸和结核杂志,2007,30(1):3.

[2] 黄思代,李朝锋.COPD急性期血清IL-8变化[J].临床肺科杂志,2005,10(6):785.

[3] 杨志峰,蔡在龙,毛积芳.NF-κB的结构功能及其与疾病的关系 [J].生化与医学,2004,24(4):347.

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[6] Mio T,Romberger DJ,Thompaon AB,et al.Cigarette smoke induces interleukin-8 release from human bronchial epithelial cell[J].Am J Respir Crit Care Med,1997,15(13):1770.

[收稿日期：2013-10-15 编校：苏建东]