呆聪液对老龄大鼠痴呆模型淋巴细胞增殖的影响

　　作者：赵淑梅 岳启安 王红艳 王益光 阎乐法 李光宗 尤敏 管福来 宫英 作者单位：261042山东省潍坊市，潍坊医学院病原生物学教研室(赵淑梅，岳启安，王红艳，尤敏，管福来，宫英);生理学教研室(王益光);中医学教研室(阎乐法);解剖学教研室(李光宗)

　　【摘要】 目的 探讨中药呆聪液对老龄鼠痴呆模型免疫功能的影响。 方法 选择22月龄的老龄SD大鼠, 脑内注射海人酸，选择性破坏神经元，制备学习和记忆功能障碍的老龄大鼠痴呆模型, 然后用不同剂量的中药呆聪液给予治疗1月，用3HTdR掺入DNA法观察呆聪液对淋巴细胞增殖的影响。 结果 低剂量呆聪液实验组可提高痴呆动物的淋巴细胞增殖能力, 与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，中剂量和大剂量实验组可显著提高痴呆动物的淋巴细胞增殖能力, 与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);但中剂量和大剂量实验组组间无显著性差异。 结论 呆聪液可提高痴呆动物模型的细胞免疫功能。

　　【关键词】 呆聪液,痴呆动物模型,淋巴细胞增殖

　　【Abstract】　Objective To explore the effect of Daicong solution on immune function in aged rat dementia model. Methods 22month old rats whose basal nuclei were destroyed by kainic acid were used as aged dementia model which had learning and memory disability. After treated with Daicong solution for one month, lymphocyte proliferation was tested by 3HTdR incorporation methods. Results Lymphocyte proliferation function in low dosage treated group were significantly increased than those in model groups (P<0.05);Lymphocyte proliferation function in middle and higher dosage groups were remarkably increased compared with model groups (P<0.01). Conclusions Daicong solution could improve lymphocyte proliferation in aged rat dementia model.

　　【Key　words】 daicong solution; dementia animal model; lymphocyte proliferation

　　老年痴呆症的发病率逐渐上升，给社会和家庭生活带来很大负担，深入探讨老年痴呆症的发病机制及有效的预防和治疗尤为重要。中药呆聪液在临床上治疗老年痴呆症已获得显著治疗效果，为了进一步探讨其作用机制,我们利用老龄鼠痴呆模型观察了呆聪液对老龄大鼠淋巴细胞增殖的影响, 现将结果报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 实验动物由山东大学医学院实验动物中心提供,22月龄的清洁级SD大鼠50只，雌雄混用，先在水迷宫中练习并记忆逃生的位置。随机选择10只，作为老龄正常对照组。除老龄正常对照组外，其余大鼠均用3%戊巴比妥钠腹腔注射(35 mg/kg)，麻醉后固定于脑立体定位仪上，参照大鼠脑定位图谱，在鼠脑的双侧无名质区域(相当于人类Meynert基底神经核)注入兴奋性氨基酸毒素海人酸1 μl(1 g/L)，选择性破坏该区域的神经元，制备痴呆动物模型，以学习和记忆功能障碍明显者为合格。

　　1.2 主要药物与试剂 (1)呆聪液由人参、生地、知母和黄芪等天然药物组成, 经潍坊医学院附属医院药剂科加工配制而成;(2)3HTdR: 北京中国原子能科学研究院提供, 1 μCi/ml包装;(3) 植物血凝素(PHA): 广州市医药工业研究所产品, 批号20032;(4) RPMI1640营养液, 美国产。

　　1.3 主要仪器 FJ2101G双道液体闪烁计数器，西安国营二六二厂生产，日本产细胞计数器;国产细胞收集器和751紫外分光光度计。

　　1.4 干预措施 40只老龄痴呆模型大鼠随机分为4组，每组10只。在各组动物喂养饲料、饮用水及生活环境完全相同的情况下，呆聪液用药组分别按5 g/(kg?d)(剂量Ⅰ组)、10 g/(kg?d)(剂量Ⅱ组)和20 g/(kg?d)(剂量Ⅲ组)生药的水提液灌胃给药，痴呆模型对照组和老龄正常对照组均用等量的生理盐水灌胃。连续给药1月后，心脏取血进行检测。

　　1.5 实验方法 实验方法见参考文献[1]。

　　1.6 统计学方法 数据用均数±标准差(±s)表示，采用方差检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 呆聪液对老龄鼠痴呆模型淋巴细胞增殖的影响 老龄痴呆模型组掺入3HTdR的量无论空白对照还是PHA诱导的淋巴细胞增殖实验都显著低于正常对照组(P<0.01), 显示痴呆模型组严重影响脑M受体合成[2]的同时还严重影响细胞免疫功能。 而剂量Ⅰ组大鼠的淋巴细胞增殖能力明显提高 (P<0.05)，剂量Ⅱ组大鼠的淋巴细胞增殖能力亦明显提高(P<0.01)，恢复到老龄大鼠的正常水平。剂量Ⅲ组与剂量Ⅱ组相比较，无显著性差异。见表1。表1 呆聪液对老龄大鼠痴呆模型淋巴细胞增殖的影响

　　3 讨论

　　老年性痴呆是以记忆障碍和智能减退为主要特征的慢性疾病。据文献报道, 老年性痴呆病人脑内乙酰胆碱与痴呆的形成密切相关, 它主要作用于分布在大脑皮质、海马、纹状体等部位的M受体上[2]。因此，由Meynert 基底核发出的神经元缺失则必伴有胆碱能功能的减退, 痴呆患者脑中胆碱能活性降低在老年性痴呆患者的记忆与认知障碍中起着重要作用[3]。高血压及糖尿病等各种原因导致的脑血流量减少，可明显增加痴呆的发病率[4]。中药呆聪液对老龄鼠痴呆模型脑M受体和免疫功能影响的实验结果显示，细胞免疫与体液免疫和脑M受体对痴呆的发生关系极为密切, 结果又很相似, 即当免疫功能出现极度低下时, 其脑M受体的合成也显著降低, 当中药呆聪液明显提高淋巴细胞增殖水平时, 其脑M受体也相应恢复到正常水平[5]。但是，细胞免疫恢复的程度随呆聪液的剂量大小而出现显著性差异(P< 0.01), 即剂量 Ⅰ 组可增强淋巴细胞的增殖，与痴呆模型对照组相比较差异显著(P<0.05)。 因在老龄鼠痴呆模型基础上用药, 剂量 Ⅰ 组的结果尚未恢复到正常对照组水平(P<0.01)。但随着用药剂量的增大，剂量 Ⅱ 组对淋巴细胞增殖的影响完全恢复到老龄鼠正常对照组的水平;剂量 Ⅲ 组对淋巴细胞增殖的影响与剂量 Ⅱ 组比较，无显著性差异(P>0.05),说明在一定范围内, 适当增加用药剂量, 其治疗效果更显著。实验结果说明, 呆聪液显著提高淋巴细胞的增殖水平。

　　机体在生化反应中产生的自由基对老年性痴呆患者脑组织进行性退化具有重要作用[6]，文献报道老龄大鼠脑组织和血浆中过氧化脂质(LPO)和单胺氧化酶(MAO)等的含量明显高于6月龄大鼠，而超氧化物歧化酶(SOD)及单胺类神经递质等明显降低[7]。经呆聪液治疗后，可提高老龄大鼠血清SOD活性，降低LPO含量，降低MAO和胆碱酯酶(CHE)的活性[8]，说明呆聪液可用于治疗老年性痴呆症。

　　【参考文献】

　　[1] 赵淑梅，张太国，岳启安，等.猪胸腺免疫抑制提取物超滤组分2对淋巴细胞增殖的影响[J].中国生化制药杂志，2003，24(3)：133134.

　　[2] 朱振铎, 刘瑞霞, 霍青, 等. 老年痴呆病的中医临床与实验研究进展[J]. 山东中医杂志, 1997，16(7)：334335.

　　[3] 刘道宽. Alzheimers病的研究进展点滴[J]. 中华神经精神科杂志, 1995，28(4)：239240.

　　[4] 刘慧英，叶翠飞，李斌，等. 老年人血管性痴呆的临床特点分析[J]. 实用老年医学，2005，19(5)：273274.

　　[5] 岳启安，赵淑梅，阎乐法，等. 呆聪液对老龄痴呆动物模型脑M受体的影响[J]. 中国中西医结合杂志，2000, 20(11)：846847.

　　[6] 赵伟康. 老年痴呆的实验研究[J]. 中国中西医结合杂志，1992，12(7)：392393.

　　[7] 黄玉芬，苄慧敏，郭海英，等. 开心散对老年大鼠记忆力和单胺类神经递质的影响[J]. 中华老年医学杂志，1998，17(3)：156158.

　　[8] Zhao SM, Zhang TG, Yue QA, et al. The effect of Daicong Solution on the serum enzymes and LPO in aged rats dementia model[J]. 中国临床康复, 2002, 6(15)：26562657.