脑出血患者血管紧张素Ⅱ受体-1基因A1166C的多态性分析

　　作者：孙洪英,和姬苓,杨月明,袁利和,程景丽　　作者单位：1.包头医学院第一附属医院神经内科，内蒙古包头 ;2.包头医学院在读研究生

　　【摘要】目的：探讨脑出血(ICH)患者血管紧张素Ⅱ受体-1(AT1R)A1166C基因多态性。方法：应用聚合酶链式反应——限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测80名ICH患者和90名健康对照者的AT1R基因型和等位基因。结果：170例样本中ICH组和正常对照组比较,AT1R AC基因型频率为32.5%，C等位基因频率为16.2%，明显高于正常对照组(P<0.05);经Logistic回归分析，发病的相对危险度(OR)为3.852，与AT1R AA基因型OR值0.260相比差异有统计学意义(P<0.05)，AT1R AC基因型增加脑出血发生的概率。结论：AT1R A1166C基因多态性可能是ICH发病的独立遗传因素。

　　【关键词】 脑出血,血管紧张素Ⅱ受体-1,基因多态性

　　Abstract Objective:To study gene polymorphisms of an interaction angiotensin II type 1 receptor (AT1R) in the patients with intracerebral hemorrhage. Methods:AT1R genotypes were determined with the method of PCR-RLFP in 80 patients with intracerebral hemorrhage(ICH)and 90 age-matched healthy controls. Results:AT1R A1166C gene polymorphism revealed significant difference in genotype and allelic distribution between ICH patients and controls .The polymorphisms of AT1R gene were all of the independent risk factors for intracerebral hemorrhage (OR=3.852, P<0.05).Conclusion:The polymorphism of AT1R A1166C is related to the incidence of ICH as independent genetic factors.

　　Key words Intracerebral hemorrhage; AT1R; Gene polymorphism

　　人类疾病除外伤几乎都存在遗传与环境因素的相互作用，仅是二者所占比重不同[1]。脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)的发生同样也受到环境与遗传因素的双重影响，目前有研究关注于AT1R基因A1166C多态性与脑梗死的关系[2-3]，而AT1R基因A1166C多态性在ICH发病中作用的研究报道鲜见。本研究运用聚合酶链反应及酶切结合银染色技术检测ICH患者AT1R基因A1166C的多态性，探讨AT1R基因多态性与ICH的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象

　　(1)ICH组：选择2004年1月至2007年3月包头医学院第一附属医院神经内科就诊的ICH患者80例,男42例，女38例;年龄60～78岁,平均66.4岁;符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，并经头部CT和/或MRI证实。(2)正常对照组：选择同期本院健康体检者90名,男46名，女44名，年龄60～71岁,平均65.7岁，均经过临床和/或影像学检查排除ICH。两组的年龄、性别、体重指数(BMI)经比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　1.2.1 DNA样品的提取

　　采集研究对象的周围静脉血2mL，储存于EDTA-Na2抗凝管，常规酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA备用。

　　1.2.2 AT1R基因A1166C多态性检测

　　应用PCR-RFLP技术，AT1R基因引物设计参照文献[4]，上游引物：5’-ATAATGTAAGCTCATCCACC-3’,下游引物：5’-GAGATTGCATTTCTGTCAGT-3’。反应体系25μL，模板DNA 2.5μL，引物各1μL，2×Pfu PCR Master Mix 12.5μL。混匀后，液体石蜡封顶进行PCR反应。94℃预变性2min，94℃变性60s，56℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环周期后再72℃延伸5min，4℃恒温保存。扩增产物10μL加5U限制性内切酶DdeⅠ及酶切缓冲液，37℃水浴12h酶切反应，将酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果，见图1。

　　1.2.3 统计学方法

　　全部数据应用SPSS 11.5软件包进行分析。基因型分布及等位基因频率应用基因计数法并通过χ2检验;基因型及等位基因相对风险率以比值比及95%可信区间表示。

　　2 结果

　　2.1 两组AT1R基因型及等位基因频率分布的比较

　　ICH组中AC基因型频率为32.5%，C等位基因频率为16.2%，明显高于正常对照组(均P<0.05)，见表1。表1 ICH组与对照组AT1R基因型与等位基因频率的比较(略)

　　2.2 入组者AT1R基因型ICH患病风险的分析

　　入组者AT1R AC基因型患ICH的比值比为3.852，与AT1R AA基因型OR值0.260相比差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨论

　　肾素-血管紧张素系统(RAS)是调节血压、维持体内水电解质平衡的重要因素。AT1R是G蛋白偶联受体，主要分布在血管平滑肌和心脏，被血管紧张素Ⅱ激活后的效应主要为对血压、水电解质平衡的影响，高血压导致的心血管系统形态学和功能上的改变，如左室重塑、心肾纤维化、血管形态和舒缩性质的改变、内皮功能的损害等。AT1R基因位于人类3号染色体长臂21-25区，A1166C位于3’未翻译区的5’端，A突变为C产生3种基因型：未突变纯合子AA型，酶切后仅有360bp片段一条带;突变杂合子AC型，酶切后有360bp、220bp、140bp片段三条带;突变纯合子CC型，酶切后有220bp、140bp片段两条带。该位点突变不导致其编码氨基酸序列及功能的改变，但可能参与转录与翻译的调控，从而影响AT1R的生理学作用[5]。

　　本研究发现，在ICH组中AT1R的AC基因型及C等位基因频率明显高于正常对照组，提示AT1R AC基因型均与ICH的发生有密切的关系。同时，两组AT1R AC基因型的个体患ICH的危险度比AA基因型高3.852倍，提示AT1R基因A1166C多态性对ICH的发生、发展产生影响。本研究结果与石静萍等[6]研究结论一致。由于基因变异对遗传表型的作用同时受环境因素的影响，而AT1R基因多态性产生的微小表型效应积累与环境的协同作用使其在ICH发生、发展过程中的作用更趋复杂，应作进一步探索。

　　目前ICH的预防多是针对一些传统危险因素的控制和预防，通过对ICH的深入研究，分子遗传学的危险因素的识别将对ICH的预防和治疗产生更广泛的影响，通过对ICH高危基因的筛查，我们将有可能更为全面地判定ICH发生的高危人群，从而可采取有针对性的预防和治疗措施，有效预防ICH的发生和控制其进展。同时我们对ICH的认知也会变得更为深入和明晰。

　　【参考文献】

　　[1]Sagnella GA,Rothwell MJ,Onipinla AK, et al. A population study of ethnic variations in the angiotensin-converting enzyme I/D polymorphism relationships with gender, hypertension and impaired glucose metabolism [J].Hypertens,1999,17:657-664.

　　[2]Thomas GN,Lin JW,Lam WW,et al.Middle cerebral artery stenosis in type Ⅱ diabetic Chinese patients is associated with conventional risk factors but not with polymorphisms of the renin-angiotensin system genes[J].Cerebrovasc Dis，2003，16(3):217-223.

　　[3]Kagiyama T,Kagiyama S,Phillips MI,et al.Expression of angiotensin type 1 and 2 receptors in brain after transient middle cerebral artery occlusion in rats[J].Regul Pept,2003,110(3):241-247.

　　[4]张秀英，王德全，许玲，等.肾素-血管紧张素系统基因多态性与2型糖尿病脑梗塞的关系[J].中华医学遗传学杂志，2001,18(6):462-465.

　　[5]Rolfs A,Weber RL,Regitz ZV,et al.Genetic polymorphism of the angiotensin Ⅱ type 1(AT1) receptor gene[J]. Bur Heart J,1994,15:108-112.

　　[6]石静萍，张颖冬，许利刚，等.AT1R基因多态性与原发性高血压合并脑血管病的相关性研究[J].南京医科大学学报，2004,24(5):487-490.