慢性HBV感染及其相关肝病患者外周血T细胞亚群的变化

乙型肝炎是一种免疫相关性疾病，机体感染HBV后并不直接对肝细胞造成损伤，而是通过诱发机体免疫间接损伤肝细胞。同时，机体产生免疫反应以清除病毒，这种免疫反应主要通过淋巴细胞亚群的改变。在细胞免疫应答中，T细胞亚群各自发挥自己的作用，外周血T细胞亚群是反映慢性乙型肝炎患者免疫状态的重要指标。本研究分析HBV携带者、慢性乙型肝炎、肝硬化、原发性肝癌及健康者外周血T淋巴细胞亚群的差异，从而探讨HBV感染后不同的临床转归与宿主细胞免疫功能的关系。
1资料与方法
1.1病例资料石家庄市第五医院2009年5月-2011年5月期间就诊的慢性HBV感染者318例，男175例，女143例，年龄18一73岁(平均年龄46.54)，临床诊断均符合2000年9月中华医学会传染病与寄生虫学分会肝病学分会《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型肝炎诊断标准，中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的原发性肝癌的临床诊断与分期标准，巨在3个月内未经免疫调节剂及抗病毒治疗。
1.2方法
1.2.1分组慢性HBV携带者8例，男6例，女2例，年龄25一62岁(平均42.35岁);慢性乙型肝炎组231例，男126例，女105例，年龄18一69岁(平均43.31岁)、肝炎肝硬化61例，男34例，女27例，年龄18一69岁(平均47.42岁);原发性肝癌18例，男10例，女8例，年龄32--78岁(平均49.72岁)。同时选取健康人22例作为正常对照组。
1.2.2检验方法(l)淋巴细胞亚群检测:用乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)抗凝管抽取静脉血4nil，其中2nil血应用流式细胞仪检测CD3+,CD4+,CD8+的百分比取100闪全血加人12mmx75~试管中，加20闪单抗，室温避光孵育30min，加溶血‘素500闪，15min，加稀释液500u,1,10min后上机检测采用美国BECKMANCOULTER公司生产的流式细胞仪，单抗C)一FITC/CD8一PE/CD3一PCS由美国BECKMANCOULTEP}公司提供(2)HBVDNA检测:2ml静脉血应用美国ABT5700荧光定量聚合酶链反应(PCP)检测仪检测HBVDNA，试剂山中山医科大学达安基因股份有限公司提供。
1.2.3统计学方法应用SPSS11.5软件，数值采用中位数(四分位间距)表示，采用Kruskal一WalksH检验分析数据，P<0.OS为差异有统计学意义。
2结果
2.l不同临床类型HBV感染者外周血淋巴细胞百分比分析HBV携带组、慢性乙型肝炎组、肝炎肝硬化组、原发性肝癌组患者CD3十细胞百分数低于正常对照组，差别均有统计一学意义(P=0.000一0.003);HBV携带组、慢性乙型肝炎组、肝炎肝硬化组、原发性肝癌组患者CD4十T细胞百分数低于正常对照组，差异均有统计学意义(P=0.000一0.009);各组CD8十T也低于正常对照组，其中肝炎肝硬化组、原发性肝癌组与正常对照组相比，差异有统计学意义(P=0.033一0.045);HBV携带组、慢性乙型肝炎组、肝炎肝硬化组、原发性肝癌组患者CD4十/CD8十比正常对照组低，但差异均无统计一学意义(P=0.055一0.230)(表1)02.2HBV感染者外周血T细胞亚群百分比分析HBVDIVA阳性及阴性组外周血CD3十、CD4十、CD8',CD4T/CD8十比正常对照组明显降低，差异有统计学意义(P=0.000一0.043)〕HBVDNA阳性与阴性组比较CD3+,CD4+,CD8十、CD4十/CD8+均升高，差异无统计学意义(P=0.055一0.292)(表2)。
3讨论
HBV感染人体后是否发病、病情的轻重及转归者{与宿主的应答有关，巨可能主要与细胞免疫反应有关·3-al。乙型肝炎细胞损伤和炎症反应是由宿主免疫反应和病毒共同作用的结果，其中主要是通过细胞免疫反应引起肝细胞病变，T淋巴细胞在其中发挥了主要作用{5一},。各种免疫细胞特别是T细胞亚群之间的调节紊乱，是机体不能清除病原体及HBV在肝内持续复制的主要原因L7es。T淋巴细胞执行特异性细胞免疫和免疫调节功能，CD4+细胞(辅助性/诱导性T细胞)与CD8十细胞(抑制性/细胞毒T细胞)代表两类主要的T细胞亚群，正常情况下两者处于动态平衡状态，当两者数目发生变化时，可导致细胞免疫功能下降和免疫调节失衡。
本实验中选择HBV携带者、慢性乙型肝炎患者及肝炎肝硬化、肝癌患者为研究对象，进行外周血T淋巴细胞亚群检测。结果显示不同类型慢性HBV感染者CD3+,CD4十、CD8十T细胞百分数及CD4-/CD8十均比正常对照组下降，CD3十、CD4TT细胞百分数下降有统计学差异，与文献报道一致}a。说明机体参加免疫反应的免疫活性细胞已经发生改变。不同临床类型HBV感染者CD4+T细胞百分比均降低，表明机体清除病毒的能力降低，可以解释HBV感染后慢性化问题LZ〕。文献is〕表明HBV感染后在体内诱导'1'细胞凋亡，导致`1细胞数量减少及亚群比例异常，并随病程进展逐渐加重，从而引起HBV感染慢性化及不同程度的肝细胞损伤，这与本试验的结果一致。
CD3`T淋巴细胞数量下降提示机体参加细胞免疫反应的免疫活性细胞不足，提示HBV感染者体内细胞免疫功能低下。国内外对慢性HBV感染者免疫功能变化的研究结果也不一，大多数结果与本实验相同本研究中各组患者CD4十T细胞计数显著低于正常人，而CD8十T细胞也低于正常人，与文献11一报导相符，但CD8十T细胞下降幅度小于CD3TT,CD4十T提示CD81T相对亢进。表明感染者体内细胞免疫功能低下，CD4+T细胞生成减少，使特异性抗体产生不足，不能清除游离的HBV，可造成病毒在体内持续存在并影响细胞活性}lzl,,CD8十T数量下降，提示主要是由于辅助性T细胞减少，无法诱导有效的免疫应答以清除病毒。大多研究报道慢性肝炎患者CD8十T淋巴细胞百分率明显高于正常人，并认为其数值增高是造成肝细胞不断破坏，引起肝炎持续活动的直接原因之一[13]。这与本实验结果不同，可能与选择的病例和检测方法有关，还有待于进一步观察。
本研究显示不同类型慢性HBV感染者之间T细胞亚群一也有程度差异，呈一定次序规律性:各组间其CD3十1',CD4十T,CD8十T百分比，依次呈逐渐下降趋势，正常对照组>慢性乙型肝炎组>肝硬化组>肝癌组，肝硬化组和肝癌组CD3十T,CD4十T,CDB十T百分率显著低于正常对照组。不同临床类型慢性HBV感染者肝脏损伤程度取决于T细胞亚群紊乱的程度，此结果与国内外文献I14」吻合。有文献X15-1G表明HBV感染后在体内诱导T细胞凋亡，导致T细胞数量减少及亚群比例异常，并随病程进展逐渐加重，从而引起HRV感染慢性化及不同程度的肝细胞损伤，这与本试验的结果一致。
本研究全面分析了HBV携带者、慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝癌等慢性HBV感染的不同阶段T细胞亚群的变化。实验结果显示不同类型慢性HBV感染者CD3十、CD4十、CD8十T细胞百分数及CD4+/CD8十均下降，与对照组相比有统计学差异，而且不同类型慢性HBV感染者之间也有程度差异，呈一定次序规律性。但研究还存在不足，细胞数量的改变不能完全反映其功能上的变化，而且外周血T细胞的数量并不能完全反映肝脏组织内的情况，需要完善T细胞功能方面的检测及肝组织活检来进一步分析CD4十细胞下降与乙型肝炎进展的关系。研究表明，对慢性肝炎抗病毒治疗可以恢复HBV特异性T淋巴细胞的免疫反应17，这就为慢性乙型肝炎的辅助治疗提供了新的思路，即纠正缺陷的HBV特异性T淋巴细胞的功能.
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