组织因子在胆管癌中表达及临床意义

作者：王群　闫慧明　郭艳丽　左怀荣　吴永嘉　郑启昌

【关键词】凝血致活酶 胆管肿瘤

         近来研究表明组织因子（tissue factor，TF）在肿瘤的血管生成、生长、转移中发挥重要的作用［1］。本文研究了TF与胆管肿瘤的相关性，以为临床诊断及治疗提供依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 病例        

　　原发胆管癌39例，均经手术切除并经病理确诊。年龄38~76岁，男22例，女17例。高分化腺癌21例，低分化腺癌11例，乳头状腺癌2例，黏液腺癌5例。按国际抗癌联盟（UICC）临床分型，Ⅰ型2例，Ⅱ型Ⅰ型8例，Ⅲ型21例，Ⅳ型8例。有淋巴结转移25例。

　　1.2 试剂   

　　Trizol提取组织总RNA试剂盒购自上海华舜生物公司，反转录试剂盒购自FERMENTS公司，Tap酶和DNA Ladder Marker 购自上海赛百盛公司，TF单克隆抗体购自HTI公司，SP免疫组化试剂盒购自华美公司。TF上游引物序列为5’GCTAGTATTATGGGCGTGAA3’，下游引物序列5’GAATACCAATGTCTCCTGCA3’，扩增产物231bp，内参βactin上游引物序列为5’GCCGGACTCGTCATACTCCT3’，下游引物序列为5’ATGCCATCCTGCGTCTGGA3’，扩增产物581bp。以上引物由上海生工生物有限公司合成。

　　1.3 方法

　　.3.1  RTPCR法检测uPA、uPARmRNA的含量
 
　　按trizol一步法提取RNA，紫外分光光度法检测纯度和浓度。按逆转录试剂盒说明书进行反转录，反应总体积为20μl。以生成的cDNA为模板进行PCR扩增，在50μl反应体系内扩增TF，βactin，PCR反应条件：95℃预变性，5min后，95℃   30s，55℃   30s，72℃  1min，循环35次，最后72℃延伸5min。取5μl扩增产物使用1.5%的琼脂糖电泳，70V恒压电泳，紫外灯观察并拍照。

　　1.3.2 免疫组织化学检测TF蛋白        
                             
　　组织标本经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，4μm切片。免疫组织化学法采用SP法。结果判断：TF主要定位于细胞膜，呈现棕黄色为阳性。每例观察10个高倍镜视野，阳性细胞≤10%为阴性，＞10%为阳性。

　　1.4　统计学方法  
  
　　用SPSS11.0统计软件对数据进行处理，图像分析仪分析各组标本相对密度，以βactin为内参照，其余泳带与其对比 ，得出相对比值，t检验各组间的差异性，P＜0.05为差异有统计学意义。Pearson x2检验TF表达水平与胆管癌病理之间的相关性。

　　2 结果

　　2.1  TFmRNA在胆管癌中的表达   

　　见图1（略）。胆管癌癌旁组织TFmRNA表达的相对密度值为0.236±0.067，胆管癌组织0.547±0.049，两者差异有统计学意义（P0.05）。胆管癌中伴有淋巴结转移者TFmRNA表达的相对密度值为0.864±0.059，明显高于无转移者。相关性检验发现FmRNA表达水平与恶性程度明显相关。

  　2.2 TF在胆管癌组织中的表达 
 
　　TF主要位于肿瘤细胞表面，在血管内皮细胞也表达。39例胆管癌组织中27例TF阳性（69.2%），在伴有转移者中TF阳性表达21例（84.0%），不伴转移者中TF阳性表达6例（42.9%）。39例胆管癌癌旁组织中有8例TF阳性表达（20.5%），且表达为弱阳性。

　　2.3 TF蛋白表达与组织病理分化关系

　　TF的表达与性别、肿瘤病理类型、组织分化程度无关，与临床分期及淋巴结转移有关（见表1）。表1 TF在胆管癌中表达与临床病理的关系（略）
                                                                                 
　　3 讨论

　　近年来研究表明，TF与肿瘤细胞的侵袭性转移力成高度正相关，与肿瘤细胞的分化程度、疾病临床预后成负相关。本实验检测了癌组织中TF在基因转录和蛋白抗原水平上的表达，发现癌组织内TF和TFmRNA表达阳性率明显高于癌旁组织，胆管癌伴有淋巴结转移者明显高于无转移者。TF表达在伴有远处转移中明显增高，可作为判断疾病预后的一个重要辅助指标。

　　参　考　文　献

　　［1］Cheng J,Bierhaus A,Schiekofer S,et al.Tissue factorA receptor involved in   the   control  of   cellular   properties ,   including   angiogenesis［J］.Thromb  Haemost  ,2001,86(1):334345.

　　闰慧明，等.组织因子在胆管癌中表达及临床意义

　　1山东省立医院内科（山东济南 250021）

　　华中科技大学同济医学院协和医院　2肝胆外科　3血研所（湖北武汉　430022）

　　4山东中医药大学附属医院药剂科（山东济南 250011）

　　5山西肿瘤医院普外科（山西太原030009）