肝硬化患者血清基质金属蛋白酶-2检测的临床意义

作者：张平，刘娅，袁迎春    作者单位：宁夏医学院附院感染疾病科，银川 750004

  【摘要】  目的 了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肝纤维化形成中的作用及与肝硬化患者肝功能损害程度的关系。方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测了52例肝炎后肝硬化患者和28例慢性肝炎患者(对照组)血清MMP-2浓度。结果 肝硬化组MMP-2显著高于对照组(P＜0.01、)；但是肝硬化患者血清中MMP-2浓度随Child-Pugh分级增高显著下降，A、B、C级之间差异均有统计学意义(P均＜0.01)，MMP-2水平A＞B＞C。同时发现纤维化指标透明质酸(HA)浓度亦高于对照组(P＜0.01)，随Child-Pugh分级增高显著上升，A、B、C级之间差异均有统计学意义，HA水平呈C＞B＞A。结论 肝硬化患者血清MMP-2水平和HA明显升高，且血清中MMP-2水平和HA与肝功能分级明显相关，表明MMP-2与肝纤维化程度有关。HA是与肝病严重程度相关的一个参数。

【关键词】  肝硬化；基质金属蛋白酶；透明质酸

基金项目：宁夏医学院面上科研基金

　　The Clinical Effects of MMP-2 on Patients with Liver Fibrosis

　　Dept. of Infectious Diseases, the Affiliated Hospital of Ningxia Med. Coll., Yinchuan 750004

　　Abstract: Objective  To explore the effect of serumal MMP-2 on hepatic-injury and the relation between serverity of hepatic-injury and the pathogenesis of fiberosis. Methods  Using ELISA,the serum concentration of MMP-2 and HA were examined in 52 cirrhosis cases with a history of hepatitis(study group) and in 28 controls with chronic viral hepatitis. Results  The serum level of MMP-2 in study group was significantly higher than that of controls (P＜0.01). The more critical by classification of Child-pugh, the lower serumal MMP-2 level (A grade vs B grade, B grade vs C grade,C grade vs A grade；P＜0.01, P＜0.01, and P＜0.01, respectively). Hyaluronic acid(HA), Unlike that of MMP-2, As the Child-Pugh classification increases , the serum level of HA in patients was significantly higher than that of the control group(C＞B＞A, P＜0.01). Conclusion  Serum concentration of MMP-2 may become an important parameter for predicting the development of liver fibrosis. It may positively contribute to the precise evaluation of fibrosis stage. HA can be a index for showing the severity of live diseases.

　　Key words： cirrhosis after hepatitis；matrix metalloprotease；HA

    肝硬化发病机制复杂。国内外大量的基础研究和临床研究工作表明，肝硬化形成的关键环节是肝细胞损伤后的纤维化过程。肝硬化是细胞外基质产生和降解不平衡的结果，基质金属蛋白酶-2(MMP-2)参与降解细胞外基质；其与肝纤维化形成的关系，已有一些报道［1-2］。为进一步了解血清MMP-2在肝纤维化形成中的作用以及与肝硬化患者肝功能损害程度的关系，本文采用双抗体“夹心”酶联免疫吸附(ELISA)方法，检测了52例肝炎后肝硬化患者血清中MMP-2和透明质酸(HA)浓度，探讨其在肝硬化形成中的作用。

　　1  材料与方法

　　1.1  对象及分组

    选择我院2005年6月—12月收治并确诊为病毒性肝炎后肝硬化的住院病人52例作为肝硬化组；28例慢性肝炎患者作为对照组。全部病例均排除肝占位性疾病、结缔组织病、血液系统病、慢性肾脏疾病、代谢性疾病、糖尿病等内分泌系统疾病以及其它炎性疾病。

    肝硬化组：52例中男36例，女16例，年龄11～72岁。平均(43±15)岁。无心、肺病史，心电图正常。根据既往病史、体检、肝功能化验、腹部B超、各型肝炎病毒血清学指标、肝硬化五项指标及相关实验室检查，其中单纯乙型肝炎病毒感染42例，其中乙丁肝炎病毒感染6例，乙丙丁肝炎病毒重叠感染1例，丙型肝炎病毒感染3例，均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。肝硬化病人中有腹水28例，食管静脉曲张31例，消化道出血10例，肝昏迷4例。肝功能Child-Pugh score分级(分级标准包括血清总胆红素、血浆白蛋白、肝性脑病、腹水的程度、营养状况)。A级17例、B级18例、C级17例。对照组：28例中，男24例，女4例，年龄10～64岁，平均(38±9)岁。

　1.2  血清标本的收集

    抽取空腹静脉血2 mL，编号分装，注入不含抗凝剂的普通试管中，离心后分离血清。

　　1.3  仪器

    酶联免疫检测仪(芬兰雷勃集团生产KHB Labsystems Wellscan K3型)，S800型离心沉淀器(上海手术器械厂生产)，电热恒温培育箱(上海跃进医疗器械厂生产)。隔水式电热恒温培养箱(PYX-DHS 上海市跃进医疗器械一厂生产)。BECKMAN ALLEGRA TM21 R centrifuge(美国产，可调温度离心机)。

　　1.4  试剂

    血清MMP-2 ELISA测试盒  美国进口分装试剂(Coated Wells：MMP-2 TPIInc.Washington 98003 USA Cat：TL858)。

　　1.5  统计学方法

　　实验数据以均x±s表示。二组间样本均数比较采用Student`s t检验，组间的两两比较采用Student-Newman-Keuls。

　　2  结果

　　2.1  两组患者血清MMP-2检测结果(表1)表1  肝硬化组与对照组患者血清MMP-2水平(略)

    肝硬化组患者血清中MMP-2浓度明显高于对照组，差异有统计学意义(t=8.032，P＜0.01)。
　
　　2.2  肝硬化患者血清MMP-2水平与肝功能分级的关系(表2)表2  不同Child-Pugh分级肝硬化患者血清MMP-2水平(略)表3  肝硬化患者血清肝功能分级与HA水平(略)

    不同Child-Pugh级别肝硬化患者血清中MMP-2水平呈现A级＞B级＞C级，说明随着肝纤维化程度进展，血清中MMP-2水平呈显著下降。B级与A级、C级与B级之间比较差异均有统计学意义(P＜0.01或0.05)。

　　2.3  肝硬化患者血清HA与肝功能分级的关系

　　3  讨论

    细胞外基质合成增加和降解减少是肝硬化发生的主要因素。MMP-2是参与降解细胞外基质成分的基质金属蛋白酶(MMP)家族的重要成员，MMP-2活化后能降解变性胶原和纤维连接蛋白。关于肝硬化患者血清中MMP-2水平报道不多。本实验结果显示，MMP-2水平在肝硬化患者明显升高，但肝硬化患者血清中MMP-2水平与肝功能分级又明显相关，不同级别肝硬化患者血清中MMP-2水平呈现A级＞B级＞C级，也就是说随着肝纤维化程度进展，血清中MMP-2水平呈下降趋势。有人认为血清中MMP-2水平与肝脏炎症活性无关，与门静脉坏死及肝纤维化程度有关［3］。血清中MMP-2大部分以无活性的酶原形式分泌，然后再在细胞外激活，因此，MMP-2可以在血循环中检测到［5］。由以上的实验及文献资料可以看出血清中MMP-2浓度与肝纤维化之间存在一定的因果关系，本组实验结果显示，血清中MMP-2水平在肝硬化患者明显升高，血清中MMP-2浓度检测可作为肝纤维化程度的一个诊断指标。在肝纤维化早期，及时终止其发生发展，则可避免肝硬化的进展。对于临床上阻止肝硬化进程提供了一个理论依据。

    肝纤维化是一种肝内弥漫性细胞外基质(ECM)过度沉积的病理过程。包括胶原和糖结合物(糖蛋白＋蛋白聚糖)。蛋白聚糖是组成、功能和分布都不相同的一些糖结合物，透明质酸即是其中之一。正常肝脏蛋白聚糖含量甚微。纤维化时，可增加3～4倍。本组实验血液中透明质酸含量，随着肝功能Child-A、B、C分级，各组中浓度依次呈上升趋势。即随着肝功能分级越差，血清含量亦升高。原因可能为：在肝纤维化过程中，肝实质细胞和间质细胞合成增加，引起肝内和血液中透明质酸含量升高，加之肝纤维化时，门体侧枝循环形成，部分透明质酸不流经肝脏导致其血清中浓度增高。肝纤维化时，肝损害累计内皮细胞功能，肝窦内皮细胞清除减少，故透明质酸是与肝病严重程度相关的一个参数。血清肝纤维化五项被用于临床诊断肝纤维化已经数年，各个标志物检测的准确性、特异性不尽一致，血清透明质酸的诊断敏感度最好，是敏感的纤维化指标［6］。本组实验表明MMP-2联合HA可作为血清纤维化标志物。检测血清MMP-2水平、HA有助于判定肝硬化。

【参考文献】
  　　［1］Takahara T，Faruik，Funaki J.Increased expression of matrix metallo-proteinase-Ⅱ inexprimental liver fibrosis in rats［J］. Hepatoligy，1995，21：787-795.

　　［2］Takahara T，Faruik，Yata， Y.Dual expression of metallopro-teinase-2 and membrane-type 1-matrix metalloproteinase in fibrotic human livers［J］. Hepatology，1997，26：1521-1529.

　　［3］Boeker KH，Haberkorn Ci，Mebets D，et al.Diagnostic potential of circulating TIMP-1 and MMP-2 as matrix of liver fibrosis in patient with chronic hepatitis C［J］. Clin Chin Acta，2004，316(1-2)：71-81.

　　［4］Murawaki Y，Yamada S，Ikuta Y，et al.Clinical usefulness of serum matrix metallproteinases-2concenteition in patients with chnonic vital liver dis-sease［J］. Hepatol，1999，30(6)：1090-1098.

　　［5］张爱风，陈平圣.基质金属蛋白酶-2在肝纤维化发生发展过程中的研究进展［J］. 胃肠病学和肝病学杂志，2002，11(3)：193-196.

　　［6］周永新.现代肝硬化诊断治疗学［M］. 北京：人民军医出版社，2002：14.