肺癌肿瘤抑制物1和CD105在食管癌组织中的表达

肺癌肿瘤抑制物yTsLCI是近年来新发现的一种抑癌基因,研究结果表明'TSLC1参与细胞间载附、细胞运动、信号转导以及免疫调节,并与人类多种肿瘤密切相关;研究结果表明CD105在血管生成中是必需的,而且CD105在多种肿瘤组织的内皮细胞中表达均上调,与肿瘤的发生发展密切相关’我们采用免疫组织化学方法检测TSLC1和CD105标记的微血管密度计数(MVD)在食管癌中的表达,探讨它们在食管癌发生发展中的作用.
    材料与方法
    1一般资料:收集广东医学院附属医院2008年3月至2011年12月病理科归档的病历资料完整的45例食管癌组织标本,所有患者术前均未行化疗或(和)放疗,同时另取距离癌组织边缘5cm非肿瘤的癌旁组织石蜡标本为对照兔抗人TSLC1多克隆抗体、鼠抗人CD105单克隆抗体、链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶(SP)试剂盒(通用型)购自美国Chemicon公司.
    2.免疫组织化学检测:石蜡包埋组织以厚4pm连续切片,常规脱蜡至水,切片浸于50mmol/L(pH8.0)乙二胺四乙酸溶液中,微波抗原修复10min,冷却至室温,充分水洗,磷酸盐缓冲液(PBS)浸洗,滴加正常山羊血清封闭液,室温20min;甩去多余液体,不洗,加人TSLC1多抗或CD105单抗4℃过夜;PBS洗;滴加SP9000通用型生物素标记二抗,37℃,40min;二氨基联苯胺(DAB)显色30s,苏木素复染,乙醇脱水、透明、中性树胶封固.DAB显色液配制:取DAB5mg溶于100ml0.05mol/1,Tris-盐酸(pH7.6)中,加人30%过氧化氢10闪,搅拌混匀后过滤(用前新配制);采用该公司提供的阳性切片为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照.
    3.阳性结果判定:TSLCl以胞核和胞质中出现棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞按半定量积分法判断两者表达,根据染色强度及阳性细胞所占比例分别记为0一3分.染色强度:未着色为0分,着色浅为1分,中度着色为2分,着色深为3分.阳性细胞百分率:高倍镜(x400)下随机选取10个视野,每个视野计数100个细胞.计算其平均阳性百分率根据平均阳性细胞百分率分为:阳性细胞数蕊5}7}为0分,6%一25为1分,26%一49%为2分,)50}/}为3分_两项评分相加,0一1分为(一),_分为(+),3一4分为(++),5一6分为(一),(+)一(一)均表示为阳性:CD105标记的MVD计数:先在低倍镜下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度最高处,即热点处;再在高倍镜(0.189mmz/视野)下,以与周围肿瘤细抱和结缔组织成分明显区别的任何1个棕色染色的内皮细饱或细饱丛维1个血管,只要结构不相连,其分支结构也作为1个血管计数;记录3个视野内的微血管数,取其平均数作为该患者的MVD值,双盲分析结果4统计学方法:应用SPSS13.0统计软件分析,各组间差异进行t检验、方差分析或X检验.
    结果
    1.TSLC1和CDI05标记的MVD在食管癌组织及癌旁组织的表达:TSLC1食管癌组织的阳性表达率为42.22%(19/45),明显低于癌旁组织的91.11%(41/45),两者差异有统计学意义(P<0.01);CD105标记的MVD食管癌组织的表达强度为38.25士4.37,明显高于癌旁组织的11.39士1.52,两者差异有统计学意义(P<0.01).
    2.TSLC1在食管癌组织中的表达与临床病理因素之间关系:TSLC1在男、女性患者癌组织中的表达率分别为44.44%(12/27),38.89%(7/18);TSLC1在年龄岌60岁和>60岁患者癌组织中的表达率分别为40.00%(10/25),45.00%(9/20);I'SLC1在病理类型鳞癌和腺癌的表达率分别为43.59%(17/39),33.33%(2/6);TSLC1在组织学分化程度为高、中、低分化癌组织中的表达率分别为46.15%(6/13),41.1s%(7/17),40.00%(6/ls);以上两两之间比较差异无统计学意交(P>0.05);TSLC1在TNM分期为I,II和I},N的癌组织中的表达率分别为57.69%(15/26),21.O5%(4/19);TSLC1在淋巴结转移无和有的癌组织中的表达率分别为60.87%(14/23),22.73%(5/22);以_L两两之间比较差异有统计学意义(P<0.05).结果表明TSLC1表达水平与食管癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05).
    3.CD105标记的MVD在食管癌组织中的表达强度与临床病理因素:MVD在男、女性患者癌组织中的表达强度分别为38.26士4.20,38.26士4.76;MVD在年龄(60岁和>60岁患者癌组织中的表达强度分别为38.26士4.34,38.27士4.54;MVD在病理类型鳞癌和腺癌的表达强度分别为38.26士4.44,38.27士4.35;以上两两之间比较差异无统计学意义(P>0.O5)_MVD在组织学分化程度为高分化、中分化、低分化癌组织中的表达强度分别为34.66土3.03,38.02土4.21,41.22士3.23;MVD在TNM分期为I,II和IQ,I},的癌组织中的表达强度分别为36.91士4.37,40.1113.75;MVD在淋巴结转移无和有的癌组织中的表达强度分别为36.60士4.26,40.00士3.88;以上两两之间比较差异有统计学意义(P<0.05).结果表明CD105标记的MVD表达强度与食管癌组织学分化程度、T-\}I分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05).
    讨论
    TSLC1缺失、低表达与多种肿瘤的发生、侵袭、转移密切相关;李太东等等采用免疫组织化学法检测TSLC1在80例非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达,结果显示TSLC1在NSCLC组织的阳性率为30.00%,明显低于癌旁组织(71.25%);TSLC1表达水平与NSCLC组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关.本组通过免疫组织化学法测定结果表明TSLCl食管癌肿瘤组织的表达强度明显减低,明显低于癌旁组织,且在肿瘤组织TSLC1表达强度与食管癌TNM分期、淋巴结转移明显相关.
    CD105在肿瘤组织边缘部分血管起源性内皮细胞中高表达,与细胞增殖指标细胞周期蛋白A(CyclinA),细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达明显相关,提示其表达可能与细胞周期调节有关.梁启廉等「7研究结果显示抗CD105单克隆抗体对人类大肠癌细胞株LoV.的生长有明显抑制作用,肿瘤区有大片坏死区,并有血栓形成,最高抑瘤率为71.88%.本研究结果表明,CD105食管癌肿瘤组织的表达强度明显高于癌旁组织,且在癌组织中CD105表达强度与食管癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关,提示CD105可作为评估食管癌生物学行为的重要指标之一.本研究结果表明,TSLC1和CD105在食管癌的发生发展中可能具有一定的作用,可能是食管癌预后相关指标并指导临床治疗.
    参考文献
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