ABO/Rh(D)血 型检测室内质控品的应用评价

质量控制是用来监测检测方法的分析性能,根据质控品的结果来判断整个检测结果的质量,提示或警告操作人员检测试剂或检测体系可能存在的问题。卫生部颁发的《血站技术操作规程(2012版)》附录B.5.1.4质量控制要求:“应建立有效的质量控制程序,确保常规平行实验中已知抗原和已知抗体的质控物反应正确,否则必须重新实验”[l]。输血相容性检测项目主要包括ABo及Rh(D)血型鉴定试验、不规则抗体筛查试验和交叉配血试验[2],血站主要以ABO/Rh(D)血型检测为主,其检测结果受多种因素影响,如试剂质量、仪器性能、测试环境、操作规范性等。室内质量控制(IQC)可及时发现试验各环节可能存在的误差,是确保检测结果准确性的重要措施。我们当前使用的国产血型ABO/Rh(D)质控品,保存期长、管间差异小,抗原抗体反应活性稳定,能够满足输血相容性检测实验室IQC相关要求E⒊1],弥补了现行血型IQC无法满足实验工作的需求现状。现将应用情况报告如下。

材料与方法

1 标本来源2013年6月10~30日湖北孝感市无偿献血者标本2018份。

2 仪器和材料:Xantus/Poseid°全自动血型分析仪、梯度微孔板。

3 试剂

3.1 ABO正定型试剂:上海血液生物医药有限公司;ABo反定型试剂:上海血液生物医药有限公司;抗D试剂:长春博德生物技术有限责任公司。

3.2 质控品组成:质控品1(A抗原:+、B抗原:一、D抗原:一、抗A:一、抗B:+)、质控品2(A抗原:一、B抗原:+、D抗原:+、抗A:+、抗B:—)。

4实验方法 采用全自动血型分析系统进行分析(梯度微板法)。

4.1重复性分析评价:参照血型鉴定质控品操作流程,取同一批次室内质控品分别用于ABO及RhD血型鉴定试验,每天用Xantus/Poseido全自动血型分析仪分析系统检测1次,连续检测⒛d,记录所有反应的凝集程度,并转化为评分方式进行统计。评分标准:4+:12分;3+:10分;2+:8分;1+:5分;阴性:0分Eδ1。

4.2 IQC操作流程:实验前,应将室内质控品从试剂冰箱取出复温30min,质控品离心(3000r/min离J心2min)此目的是为红细胞与血浆更好分离,便于(红细胞)抗原、抗体分别加样。IQC完成后尽快放回试剂冰箱,室内质控品每天置于室温时间应不超过90min,并于有效期内使用。每日常规试验同时进行IQC,若试验中途更换不同批号试剂应加做一次IQC。首次使用质控品,需要连续做3d试验,结果一致方可定为参考值;更换不同批号质控品时,需新旧质控品同时做,连续做2d,结果一致,可确定参考值。参考值确定后即可进行日常室内质控,并填写每批实验室内质控记录。IQC结果分析:实验结果与靶值一致为在控(如本批号质控品1为A型抗D—,质控品2为B型抗D+即为靶值),不符为失控。若出现失控情况应查明失控原因，及时纠正,做好记录 。

5 统计学处理

应用spss13.00统计软件,所得数据以r‘V表示结果重复性分析评价结果ABO及RhD血型筛查试验室内质控品相应抗原、抗体反应强度积分结果

讨论

IQC是确保检测结果准确性的重要措施,合格的室内质控品是开展IQC并获得质控结果的重要物质基础。本研究对ABO及RhD血型筛查试验室内质控品主要参考指标(抗原、抗体反应强度)的重复性进行分析评价,所有指标均小于5.0%,表明室内质控品具有良好的重复性、管间差异小,保存期达60d,可避免频繁更换质控品批号,减轻实验室负担。本实验室于⒛13年6月10~30日合计检测⒛18人次,共计zO批次IQC,出现1次结果失控。分析失控原因可能包括:①仪器加样量有误;②试剂被污染;③实验仪器管路被细菌污染;①人员操作失误等。本次失控结果经分析并非由于室内质控品自身原因所致。对于IQC过程中发现的失控情况应及时查找原因并予以纠正。首先要排除质控品自身因素,确认在有效期内,无明显溶血、无污染、无异物;然后重复全部试验,排除随机误差,包括标本处理、试剂处理、操作步骤和方法、反应时间等因素;若结果仍然异常,需要排除系统误差,如试剂因素、设各因素、环境、耗材等;若结果仍然异常,进行对比试验,找到认为排除而实际上未排除的环节,若对比试验结果正常,则可能是系统误差,应进一步查找原因,仍然为排除的应联系厂家解决。最终确保检测结果可靠。实验室实施血型IQC应制定相应的IQC规则。①IQC频次,常规试验应在每天第1批次试验同时进行;②质控品选择的基本要求,每个试验项目每次质控应选择1个阳性的对照质控品,1个阴性对照质控品;③过程控制,一般选择2个质控标本,1个标本为A型、1个为标本为B型,2个标本RhD血型1个为阴性,1个为阳性,可选用商品化的质控品,也可以使用自制质控品;④试剂控制,抗A、抗B血清与反定A、B细胞:采用互相验证的方法做质控,即同时对A、B、O细胞正定型,只要Ac与抗A、Bc·与抗B能够出现4+的凝集反应,而0c不出现任何凝集,即认为抗A、抗B血清与反定Ac、Bc、Oc质控合格[6□。输血相容性检测的IQC项目分为定性或半定量试验,与传统检验项目的IQC有所不同,为此,它不适于通过Cut。ff值判断阴阳性结果,质控结果不呈正态分布,也无法绘制准确可靠的质控图,主要是通过与质控品定标时的反应强度进行比对,阴性质控出现阳性结果或阳性质控结果与预期结果比较超过1个凝集强度的差异时,均视为失控。综上所述,本实验室通过使用ABO/Rh(D)血型检测室内质控品,重复性好、变异性小,其性能指标可以满足实验室血型室内质控的实际需求,保证了输血安全。

参考文献

1 《血站技术操作规程(2012版)》附录B。

2 王培华.输血技术学EM]。北京:人民卫生出版社,1998:132-147。

3 于洋,马春娅.自制输血相容性检测室内质控品保存条件的研究EJ彐.中国实验血液学杂志,⒛10,18:780-784,

4 于洋,马春娅。输血相容性检测室内质控品制备技术优化与性能评价EJ1中国输血杂志,2011,24:2630。

5 于洋,汪德清.输血相容性检测室内质量控制体系建设EJ].中国输血杂志,2009,22:79⒍792