合肥地区无偿献血者HBV感染调查及输血残余风险分析

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)引起的全球范围内流行的传染病，可经输血传播。我国是HCV感染高发区，据报道我国人群乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)携带率为7.18%。对无偿献血者进行HCV相关指标的检测，是控制乙型肝炎传播的重要环节。多年来，采供血机构应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedim-munosorbentassay,ELISA)对HBsAg进行2种试剂的检测，输血感染HBV的状况得到了有效控制。但是，ELISA技术对于窗口期、隐匿性感染(Oc-culthepatitisBinfection,OBI)、病毒变异株的检测等，仍存在一定缺陷。为进一步保障输血安全，于2012年引进核酸扩增技术(nucleicacidamplifi-canontest,NAT)对血液HBVDNA进行检测，现将结果报告如下。
　　材料与方法
　　1 材料2008年1月2013年4月在安徽省血液中心献血的所有无偿献血者标本。其中2011年12月31日～2013年4月29日采集核酸检测标本68662份。ELISA初复检使用EDTA-K:抗凝真空采血管，NAT检测采用EDTA-K2分离胶抗凝真空采血管(BD公司)。依照卫生部的指导意见，核酸标本采集后4h内离心，1500g离心10min,2℃～8℃保存。核酸标本次日及时检测，ELISA标本72h内完成检测。
　　2 仪器ProcleixTIGRIS核酸检测系统(美国诺华公司),ChiTaSBSS120。达速自动化磁珠操作平台(上海浩源公司)，ABI7500荧光定量PCR仪，STAR全自动加样仪(瑞士HAMILTON公司)，FAME全自动酶免分析仪(瑞士HAMILTON公司)。
　　3 试剂ELISA试剂:采用一种国产试剂加一种进口试剂的模式。国产试剂(北京万泰、厦门新创)，进口试剂(法国伯乐、法国梅里埃)，乙型肝炎血清标志物检测试剂盒均为北京万泰试剂。NAT检测试剂:HBV,HCV,HIV(1型)核酸检测试剂(PCR一荧光法，上海浩源公司;TMA一化学发光法，美国诺华公司)02种核酸检测试剂轮流使用，互为备份(以下2种核酸试剂简称为“浩源”、“诺华”)。
　　4 检测流程核酸标本于采集后第2天检测;ELISA标本则在送检后72h内完成ELISA检测，若有反应性标本，则于次日双孔复查。具体依照仪器和试剂盒说明书要求操作。
　　5 判定规则(1)ELISA:S/CO>7判为阳性，其中0.7<S/CO<1为灰区，灰区标本参照阳性样本处理。复查2孔中任意一孔阳性则结果判为阳性。(2)PCR一荧光法(浩源):CT<45判为阳性。TMA一化学发光法(诺华):S/CO>1判为阳性。
　　6 对45份ELISA阴性HBVDNA阳性样本采用ELISA法测定乙型肝炎血清标志物:抗-HBs,HBeAg、抗-HBe、抗-HBc。
　　结果
　　1 献血者HBsAg和HBVDNA检测结果2008年1月一2013年4月对442567份标本进行HBsAg检测，结果1894例阳性，总阳性率为42800，近2年阳性率均大于0.500;2012年1月一2013年4月对68662份标本同时检测HBsAg和HBVDNA,HBVDNA阳性数为176例，总阳性率为0.256%。2HBVDNA和HBsAg检测结果的对比分析68662份标本中有45例HBsAg阴性、HBVDNA阳性，残余风险高达。95例HBsAg双试剂阳性、
　　2 30例HBsAg单试剂阳性的标本HBVDNA检测阴性。
　　3 HBVDNA阳性HBsAg单试剂阳性标本的ELISA检测情况176份HBVDNA阳性标本中有5例HBsAg单试剂阳性，其中S/CO值小于1的有2例，国产试剂4例，进口试剂1例。
　　4 乙型肝炎血清标志物检测结果对45例HB-sAg阴性H13VDNA阳性标本进行乙型肝炎血清标志物检测，有5例五项标志物检测全阴性，其余40例中抗-HBs阳性24例，抗-HBC:阳性34例。
　　讨论
　　我国是乙肝高流行地区，约1.2亿人携带HBV。控制HBV输血传播、保障供血安全是采供血机构肩负的重要使命。1993年卫生部颁布的《血站基本标准》规定:血站必须应用ELISA方法，同时采用2种试剂对献血者血样实施2次HBsAg、抗-HCV和抗一HIV筛查。此标准实施后，极大地降低了输血HBV感染的发生率.但是ELISA技术由于自身缺陷而存在漏检，导致输血残余风险时有发生。NAT自20世纪90年代开始，逐步在发达国家应用于血液病毒筛查，据报道可缩短HBV检测的窗口期，降低40%~50%输血传播病毒的残余风险度。我国自2010年在部分采供血机构开始核酸检测的试点，2011年扩展到所有的血液中心和部分中心血站。
　　我们采用EILISA法检测了合肥地区442567份无偿献血者血清标本，结果发现1894例阳性(0.428%)，阳性率波动在0.291%--0.54%，近2年有明显升一高。原因可能是:一是该地区经济发展，城市进程加快，导致人口增多和流动性增加。二是EI工SA试剂灵敏度不断提升。ELISA和NAT并行检测的68662份标本中，HBsAg阴性HBVDNA阳性标本;p份.HBV的残余风险率为0.066%，明显高于欧美发达国家HBV流行率低的地区几·6「，低于国内南昌丁的0.1200，与大连0.06%相当。不同文献报道存在差异可能原因有:①乙肝感染率各地存在差异。②ELISA技术因不同实验室使用的试剂和设备不同，检测结果存在差异。③部分欧美国家将抗一HBc纳人血清学检测，从而提高了血清学OBI的检出率，HBVDNA检出率因此降低。
　　2012年初卫生部出台新的《血站技术操作规程》，允许采供血机构采用EI,ISA法和NAT法各一遍的新模式对HBV,HCV,HIV进行检测。去掉一遍ELISA检测是否存在风险?以及去掉哪种ELISA试剂?需要根据实际数据进行研究分析。230例HBVDNA阴性HBsAg单试剂阳性的标本因为没做确认实验，无法判断真阳性还是假阳性，但根据王卓研等研究报道的血站单试剂阳性样本中确认阳性比例11%测算，如果实施新模式将有部分标本漏检。本研究还发现5例HBsAg单试阳性的标本HBVDNA阳性，且并非一种试剂。因此我们有必要在今后的研究中刘一新模式的风险效益进行慎重评估。
　　此外，我们注意到95例HBsAg双试剂阳性的标本HBVDNA阴性，国内多家血站也报道过这种情况，原因可能为病毒变异、低病毒载量或治疗药物的影响，当然也不能排除ELISA试剂假阳可能。这一也在一定程度上表明EI_ISA和NAT的互补作用，NAT不能替代ELISA，因为NAT检测也受到窗口期、病毒变异、低病毒含量及实验操作的影响，两者结合更能保证临床用血的安全。
　　HBsAg阴性、HBVDNA阳性标本乙型肝炎血清学标志物检测全阴结果的有几例.疑为窗口期感染，这需要后续追踪实验证实其余40例伴有或不伴有抗-HBc和抗-HBs.属于OBI.因此OBI已成为HBV输血残余风险的主要因素。OBI的具体机制尚未阐明，可能与下列因素有关:HBV基因变异，尤其是S基因的变异，造成HBsAg表达降低，常规方法无法检测;HBVDNA整合到宿主染色体内导致DNA序列重排，影响HBsAg表达。
　　综上所述，ELISA,NAT两种检测技术的结合有助于提高筛查HBV感染的阳性率.有一效减低HBV经输血传播的残余风险.具有一定的推广应用价值。