硫化氢在膀胱癌细胞株的作用试验研究

膀胱肿瘤是我国泌尿系统肿瘤中发病率最高的一种，其可发生于任何年龄，主要发病年龄集中在中年以后，膀胱肿瘤的发病机制和制约因素并未研究明晰[1]。所以早期发现、诊断膀胱肿瘤就成为了世界公认的难题。硫化氢(H2S)广泛存在于人体内，另外，在自发性高血压、慢性阻塞性肺气肿、脓毒血症或出血性休克、阿尔茨海默病、肝癌、胃黏膜损伤及肝硬化等多种疾病过程中发挥着重要的病理生理效应[2]。笔者通过对胱硫醚- γ-裂解酶(CSE)蛋白在膀胱肿瘤细胞中表达的检测、膀胱肿瘤组织CSEmRNA水平的表达情况的检测，具体研究气体信号分子硫化氢在膀胱肿瘤T24细胞株的发生、发展过程中所起到的作用与简单相关机制，现报告如下。

1材料与方法

1.1材料选择：人细胞膀胱癌细胞株T24由南方医科大学病理和生化试验室提供，T24细胞通常是作为药物敏感性研究的模型被应用，在含有每毫升100 U链霉素和10%新生牛血清的RPMI-1640培养液内，置37℃、5%CO2孵箱中传代培养。

1.2试验方法：选用膀胱肿瘤T24细胞株30瓶，随机分三组，每组10瓶，一组经正常繁殖(作为对照组)，一组在繁殖的同时采用同一浓度的硫氢化钠刺激(A组)，第三组各瓶细胞分别采用0.0001~0.5000 mmol/L浓度的硫氢化钠刺激(B组)。之后前两组采用免疫组织化学方法分别检测各组膀胱肿瘤T24细胞中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的蛋白表达，同时采用RT-PCR方法检测膀胱肿瘤T24细胞中CSEm RNA水平的表达情况。第三组通过显微镜观察膀胱肿瘤T24细胞形态改变，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测膀胱肿瘤T24细胞增殖，每个试验至少重复3次。

1.3统计学方法：采用SAS 13.0软件对数据进行分析，mRNA表达水平与蛋白表达水平和细胞增殖水平对比采用t检验与多组间F分析，P<0.05代表差异有统计学意义。

2结果

2.1T24细胞增殖情况：经过分析，B组随着硫氢化钠浓度的增加，膀胱肿瘤T24细胞的OD值也在增加，表明肿瘤细胞发生增殖，在不同浓度之间对比差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2免疫组化结果对比：经过观察，A组的CSE蛋白表达水平为256.51±17.52，而对照组为153.25±20.41，A组的CSE蛋白表达水平明显高于对照组，对比差异有统计学意义(P<0.05)。2.3RT-PCR结果分析：经过观察，A组的CSEmRNA表达水平为58.11±4.25，而对照组为22.14±4.88，A组的CSEmRNA表达水平明显高于对照组，对比差异有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

膀胱癌是泌尿系统最常见的肿瘤，其中大多数为浅表性癌，其复发率高，恶性程度也比较高，导致浸润能力增强。近〖JP+1〗年随着我国人口老龄化的到来、各种诊疗技术的应用和生活质量的提高，膀胱癌的发生率呈明显的上升趋势，现在认为膀胱肿瘤是多基因、多因素共同作用的结果[3]。当前关于硫化氢对于膀胱肿瘤的发生、发展是否有影响不是十分明确。硫化氢(H2S)作为一种有毒气体，人类认识和研究其作用已有300多年的历史。直到20世纪90年代中期，人们才发现H2S是存在生物体内的一种新型的内源性气体信号分子。H2S首先被报道是一种存在于脑内的神经递质，生理浓度的H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用。近年来研究证实，内源性H2S是一种新的气体信号分子，对其进一步研究是当前生物医学领域的崭新课题，具有重要的理论和临床意义。一般认为恶性转化的肿瘤细胞是因为生长失控、过度增殖。从细胞增殖角度来理解肿瘤的发生机制，是由于肿瘤细胞的增殖凋亡机制发生障碍，肿瘤细胞的正常清除机制受阻所致。本组资料结果显示，B组随着硫氢化钠浓度的增加，膀胱肿瘤T24细胞的OD值也在增加，表明肿瘤细胞发生增殖，在不同浓度之间对比差异有统计学意义(P<0.05)。胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)是存在于生物体内的具有分解L-半胱氨酸功能的5′-吡咯醛磷酸依赖性水解酶，其在体内为硫化氢(H2S)的形成提供了重要的工具。CSE在神经系统表达明显，CSE在心血管系统含量较为丰富。CSE表达能够影响内源性H2S浓度的高低，并且CSE能够促进肝癌肿瘤细胞增殖[4]。本组资料中A组的CSE蛋白表达水平明显高于对照组，对比差异有统计学意义(P<0.05)。A组的CSEmRNA表达水平明显高于对照组，对比差异有统计学意义(P<0.05)。总之，硫化氢在膀胱癌细胞株的应用能增强肿瘤细胞的增殖，其作用的发挥与增强CSE的表达有关。

4参考文献

[1]Gong K，Li W，Shikonin A.Chinese plant-derived naphthoquinone， induce s apoptosis in hepatocellular carcinoma cells through reactive oxygen species： a potential new treatment for hepatocellular carcinoma[J].Free Radic Biol Med ，2011，51(12)：2259.

[2]梁启荣.职业性急性硫化氢中毒救治现状[J].职业与健康，2013，29(14)：1808 .

[3]王华，刘卓，王宗平，等.双突变溶瘤腺病毒联合吉西他滨治疗裸鼠原位膀胱癌的效果[J].中华肿瘤杂志，2013，35(6)：412.

[4]刘廷江，孙福振，杨涛，等.低氧诱导因子-1α沉默对膀胱癌细胞血管内皮生长因子和葡萄糖转运蛋白-1表达的影响[J].中华试验外科杂志，2013，30(1)：108.

[收稿日期：2014-01-16编校：郑英善]