动态监测O型孕妇lgG抗A(B)效价与新生儿溶血病关系的探讨

新生儿溶血病(hemolytic disease of newborn，HDN)一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。在我国HDN中ABO血型系统较多，以母亲为O型，子女为A型或B型的发病率为最高，检测母亲血清中有无IgG 性质的抗A(B) 抗体及其效价，即可预测ABO系统HDN 发生的可能性[1]。我们动态监测464对O型孕妇(其丈夫非O型)产前IgG抗A(B)抗体检测，探讨其与HDN发生率的关系。

1资料与方法

1.1一般资料：2010年4月至2012年8月在我院定期产前检查妊娠20周以上的O型RhD阳性血孕妇464例，年龄为20～43岁，按孕产次1次，多于1次分为两组，首次妊娠253例(占54.5%)，二次及以上妊娠211例(占45.5%)，病例排除孕妇不规则抗体检测阳性。其丈夫血型为A型186例、B型194例、AB型84例。在孕20周开始检测血清中IgG抗A(B)的效价，以后每4周动态监测一次。对孕妇所生的新生儿检查ABO、RhD血型，并对有临床HDN症状者检测血清学3项(直接抗球蛋白试验、血清游离抗体试验及抗体释放试验)。

1.2试剂及仪器：0.2 mol/L 2-巯基乙醇(2-M e)、抗-A、抗-B、抗-D、多特异性抗球蛋白试剂、反定型标准红细胞(A、B、O)、抗体筛选红细胞均为上海市血液生物医药有限责任公司提供。KA-2000型血库专用离心机(日本KUBOTA公司)，HHW.21-420 型水浴恒温箱(北京永光明有限公司)。

1.3方法

1.3.1孕妇血型抗体效价检测：在O型孕妇(其丈夫非O型)妊娠20周开始进行孕妇IgG抗A(B)血型抗体效价、母体不规则抗体测定，以后每4周复检一次;①效价检测采用间接抗球蛋白试管法，将孕妇血清0.1 ml与等量 2-Me 应用液混合放 37℃ 水浴 30 min，处理后的血清0.05 ml用生理盐水倍比稀释，加入孕妇丈夫3%~5%红细胞0.05 ml(丈夫为AB型的，同时做抗A和抗B，加对应的反定型红细胞)离心检测其残存盐水效价，再放 37℃水浴 30 min 后三洗加多特异性抗球蛋白试剂离心，检测IgG效价。②不规则抗体筛查，操作按说明书进行。

1.3.2新生儿血型血清学检测：检测O型血孕妇所分娩的新生儿ABO、RhD血型;新生儿溶血病血清学检测 (直接抗人球蛋白试验、游离抗体检测、抗体释放试验)。按文献[2]方法操作。

1.4结果判定

1.4.1IgG抗A(B)血型抗体效价：用肉眼观察结果，IgG效价≥残存盐水效价2管为实验有效，呈弱凝集反应(±)第一管的最高稀释倍数的倒数即为该抗体的效价。IgG抗A(B)效价<64者判断为正常，≥64者为阳性。

1.4.2ABO-HDN诊断标准[3]:ABO母婴血型不合，结合临床表现，HDN三项检查阳性，或直接抗球蛋白试验(DAT)和红细胞抗体释放试验其中一项阳性。

1.5统计学分析：采用SPSS13.0进行统计学分析，组间比较采用t检验，率的比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1不同孕次孕妇IgG抗A(B)效价与妊娠周数的关系：464例O型孕妇，按不同孕次分组，孕妇IgG抗A(B)效价与妊娠周数的关系见图1。由图1可以看出，随着孕期的增加，抗体效价也随着升高，孕1次组孕妇gG抗A(B)效价水平低于孕2次及以上组。在本研究对象中也有24例孕妇的抗体效价随着孕期的增加而降低。

图1不同孕次孕妇IgG抗A(B)效价与妊娠周数的关系

2.2抗体效价升降与新生儿的关系：464例O型孕妇按不同孕次，将孕妇孕早期抗体效价与孕晚期的抗体效价作比较,孕1次组和孕2次以上组抗体效价升高2个及以上滴度，HDN发病率与抗体效价升高1个、相同组比较有显著性差异(P<0.05)。孕妇抗体效价升降的滴度与HDN的关系见表1。

表1孕晚期较孕早期IgG抗A(B)抗体效价升降滴度与新生儿溶血的关系[例(%)]

IgG抗A(B)效价

升降滴度数分布例数孕1次例数 HDN发病数≥孕2次例数 HDN发病数下降24140100相同2721583(1.9%)1144(3.5%)升高1个130784(5.1%)626(9.7%)升高2个及以上38137(53.8%)①2515(60.0%)②注：①孕1次组，抗体效价升降滴度各组间比较，χ2=60.68，P<0.05;②孕2次及以上组，抗体效价升降滴度各组间比较，χ2=56.32，P<0.05

2.3孕妇抗体效价与HDN的关系：不同孕次O型孕妇孕晚期抗体效价与HDN的关系见表2。随抗体效价的升高,HDN的发生率也升高,孕2次级以上组HDN的发生率高于孕1次组(P<0.05)。

表2孕妇孕晚期IgG抗A(B)血型抗体效价与HDN的关系

母血清IgG抗

A(B)抗体效价例数孕1次例数 HDN发病数≥孕2次例数 HDN发病数≤32274174010006492542(3.8)384(10.5)12860284(14.3)329(28.1)25626104(40.0)166(37.5)≥5121254(80.0)76(85.7)合计46425314(5.5)21125(11.8)①注：①HDN发病率，孕1次与孕2次及以上组间比较，χ2=5.939，P<0.05

3讨论

本研究结果显示，464例O型孕妇随着孕期的增加，IgG抗-A(B)效价水平孕晚期较孕早期有所升高。这与文献[4]报道的结果一致。有研究认为在孕早期，由于进入母体的胎儿红细胞相对较少，所以母体产生抗体的量少，抗体效价低。随着孕期的增加，由于绒毛膜的破裂，进入母体的胎儿红细胞增加，不断刺激母体，使母体产生抗体量增加，抗体效价升高[5]。当抗体的效价上升超过机体的保护机制时，导致HDN的发生。但从本研究中还可看出IgG抗-A(B)效价≥64的190例孕妇，分娩的新生儿发生ABO-HDN的39例，占20.5%，多数抗体效价在较高水平的孕妇分娩的新生儿没有发病，一般认为这可能与胎儿A、B抗原的强弱、血型物质的含量、胎盘的屏障作用以及IgG亚类不同有关[6]。

将孕妇孕早期抗体效价与孕晚期的抗体效价作比较，在本研究中，抗体效价升高2滴度的孕妇所分娩的新生儿，HDN发生率为孕1次组25%和孕2次及以上组为37.5%，明显高于抗体效价升高1个、相同组。可见，孕早期到孕晚期IgG抗A(B)效价升高2个滴度可以作为预测发生HDN的一个十分重要的指标。研究提示，随抗体效价的升高，HDN的发生率也升高。孕2次及以上组抗体效价升高水平高于孕1次组，HDN发生率也高于孕1次组。

在本次研究中，也发现24例孕早期时的IgG效价就偏高，通过对症治疗，随着孕期的增加，抗体效价逐渐下降。对孕妇所生产的新生儿进行跟踪，均未发生HDN。是机体清除了抗体，还是治疗控制了效价的升高，具体原因有待于进一步探讨。

动态监测孕妇血清IgG抗A(B)效价，结合孕妇孕次、抗体效价的高低，可以更加准确地预测HDN的发生，为临床及早采取预防、治疗措施，有效地降低HDN的发病率，提供依据。

4参考文献

[1]刘达庄.免疫血液学[M].上海:上海科学技术出版社，2002:128-144.

[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006：246 -270.

[3]金汉珍，黄德珉，官希吉，等.实用新生儿学[M].第2版.北京:人民卫生出版社，2005：531-550.

[4]李坤，李琳.动态检测“O”型孕妇血型抗体效价的临床意义[J].吉林医学， 2011,32(13):2580.

[5]Mohamed H，Turner JN，CagganaM. Biochip forseparating fetal cells from maternal circulation[J]. J ChromatogrA，2007，1162(2):187.

[6]李 勇,杨贵贞:人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版社,1999:175.

[收稿日期：2013-09-29编校：王丽娜]