病理组织免疫组化技术的研究

免疫组化主要包括两个部分，一是免疫细胞化学，二是免疫组织化学。笔者主要以淋巴结患者为例，讨论淋巴结病理组织免疫组化技术与标准化操作方法，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择我院2012年5月～2013年5月78例淋巴结患者为研究对象，男45例，女33例，年龄19～78岁，平均(45.73±7.43)岁。其中31例颈部淋巴结患者，22例腹膜后淋巴结患者，25例锁骨下淋巴结患者。分为对照组与观察组，每组39例。其中未行标准化淋巴结组织HE片患者为对照组，男 18例，女21例，平均年龄(46.43±6.13)岁。行标准化淋巴结组织HE片穿刺患者为观察组，男25例，女14例，平均年龄(48.43±7.83)岁。

1.2 一般方法

1.2.1 标准化淋巴结组织HE片：对照组未按照标准化要求进行淋巴结组织HE片。首先取材，按照相关标准来说，切片时必须对组织厚度进行合理控制，厚度最好控制在0.18 cm左右。而对照组在切片过程中，对切片的厚薄度没有按照相关标准进行明确。观察组行标准化淋巴结组织HE片，具体流程如下：待淋巴结组织离体后，取百分之四的中性甲醛置于其中，并将其固定，若在 1例标本中发现穿刺组织数量较多，则应利用过滤纸将每条组织包好，且使其置于脱水盒内，确保进入包埋程序时，组织位于同一平面。将切片厚度定于2.5 μm，可将每张蜡片切为7片，其中取一张蜡片切片，将其染为HE切片，并涂于载玻片上，为免疫组化做准备。

1.2.2 免疫组化方法：首先将切片行常规脱蜡，然后置于水中。取3%的甲醇液，在室温作用达到一刻钟后，用清水清洗切片，然后利用蒸馏水将切片清洗两次。取pH值达到6.0的1 100 ml柠檬酸，将其置于高压锅中(直径25 cm)并盖好，此时开始加热， 2 min后停止加热，使其自然冷却，然后从温室内取出。利用PBS 对其进行冲洗，冲洗次数为2次，时长为2 min/次。添加二抗，当 DAB显色时便可停止添加，对比抗体的阴性与阳性。

1.2.3 免疫组化染色切片优良率的评判标准：组织结构没有被破坏，对阳性物质准确定位，有干净清晰的背景，不存在特殊着色现象，没有发生脱色情况，存在高度的特异性与敏感性。

1.3 统计学方法：使用SPSS 16.0对各项资料进行统计、分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

通过研究发现观察组的中有37例患者免疫组化切片显示为优良状态，优良切片率为94.9%，对照组中有21例患者免疫组化切 片显示为优良状态，优良切片率为53.8%，两组患者在免疫组化切片优良率差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组患者的免疫组化切片状况对比[例(%)]

组别     例数     优良切片     脱片

观察组   39      37(94.9)    2(5.1)

对照组   39      21(53.8)   18(46.2)

3 讨论

目前，免疫组化技术取得了很大进展，它具有高度敏感性。免疫组化技术在刚刚起步阶段遇到很多阻碍，尤其是技术上受到太多限制，导致其无法充分发挥作用[1]。以往的抗体稀释程度并不高，最多只能够稀释至几十倍，随着医疗技术的不断革新，抗体稀释程度越来越高，可以达到上万倍的稀释度，并且对抗体抗原反应具有较高的敏感性[2]。

现阶段，由于实验室没有设定一个明确标准，致使免疫化组织在研究结果上具有加大差异，这表明建立一个统一的标准，有利于让免疫化组织技术变得更为完善，在疾病治疗与预后中充分发挥作用。以本次研究以淋巴结患者为例，从中可看出在免疫化制片过程中，必须对透明度、脱水、试剂浓度等进行严格控制，在实施脱水时，要从浓度较低的乙醇开始进行，然后逐渐向百分之百纯度乙醇实施脱水，通常情况下，浓度太高的乙醇更加要注重控制脱水时长，时间不能太长，有利于避免组织变硬，组织变硬之后，制片难度会更大。

免疫组化结果会受到很多因素的影响，抗原修复标准化是其中最关键的影响因素。以往都采用微波加热法实现抗原修复，现阶段，均采用高压锅加热法，这种方法取得了效果最好。加热时间的控制需非常准确，前后准备时间最好控制在3 min之内，如果时间太长，便会加深染色背景的颜色。

从本次研究可看出观察组的中有37例患者免疫组化切片显示为优良状态，优良切片率为94.9%，对照组中有21例患者免疫组化切片显示为优良状态，优良切片率为53.8%，这表明只有通过有效的标准化操作才能够确保免疫化实验结果的准确性，使免疫化技术充分发挥作用，有利于进一步了解患者病情。

4 参考文献

[1] 刘洪博,王文智,邱 雷,等.双重免疫组化技术检测胃低分化腺癌误诊为淋巴瘤一例[J].天津医药,2013,34(8):762.

[2] 于晓辉,于海鹏,张方信,等.巨噬细胞移动抑制因子在胃癌组织中的表达及与组织病理分化程度的相关性研究[J].西北国防医学杂志,2010,31(1):10.

[收稿日期：2013-11-20 编校：郑英善]