PTEN基因和增殖细胞核抗原在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义

作者                 作者单位

潘丹   温州市第三人民医院 病理科，浙江 温州 325000

陈国荣 温州市第三人民医院 病理科，浙江 温州 325000

金茹   温州医学院附属第一医院 病理科，浙江 温州 325000

Expression and significance of PTEN，PCNA in laryngeal squamous cell carcinoma and their correlation PAN Dan*，CHEN Guo-rong，JIN Ru. *Department of Pathology，Wenzhou Third People’s Hospital， Wenzhou， 325000

Abstract: Objective: To explore the expression and significance of PTEN and PCNA in laryngeal squemous cell Carcinoma (LSCC). Methods: The expression of PTEN and PCNA in 40 cases of laryngeal squemous cell Carcinoma (LSCC) was detected with immunohistochemical method (SP)、Thirty cases of polyp of vocal cord were used as control. Results: The positive expression rate of PTEN in LSCC was 52.5%. The expression of PTEN was significantly lower in Lscc compared to normal controls. The expression of PTEN in LSCC was related to pathological stages，clinical stage and metastasis of lymph node (P <0.05)， but was not associated with age， and hypopharyngeal. (P >0.05). The positive rate of PCNA was 77.5% and 16.7% in LSCC and polyp of vocal cord， respectively， and the intensity of positive expression of PCNA was significally related to the histological grade，clinical stage and metastasis of lymph node(P <0.05)， but was not associated with age， and tumor site. PTEN activity was associated with PCNA expression in LSCC (P <0.05). Conclusion: Decreased expression of PTEN found in LSCC，may be correlated with the development and metastasis of LSCC，and reversely correlated with the expression of PCNA: Combined detection of PTEN and PCNA may be helpful to evaluate the progress and prognosis of LSCC.

Key words: laryngeal neoplasms;carcinoma，squamous cell;PTEN;proliferating cell nuclear antigen;immunohistochemical

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势。通过对肿瘤的深入研究，人们发现肿瘤也是一种基因异常变化的疾病，有多种癌基因及抑癌基因参与发病。PTEN基因是一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，其基因的突变或丢失必然引起编码蛋白异常表达。增殖细胞核抗原(Proliferating ceu nuclear antigen，PCNA)是一种与细胞周期相关的蛋白，参与细胞DNA复制，其表达水平与肿瘤细胞增殖有关。近年来有学者发现，PTEN和PCNA蛋白与许多肿瘤中的发生、发展有关，但与喉鳞状细胞癌的关系研究较少文献报道。本研究应用免疫组化方法，对喉癌中PTEN和PCNA的表达水平进行分析，旨在探讨两者之间及其与喉癌临床特点的关系。

1 材料和方法

1.1 材料 收集2002-2004年温州市第三人民医院及温州医学院附属第一医院手术治疗的喉癌患者病倒40例，术后经病理证实为鳞状细胞癌，术前均未进行放疗和化疗。40例中，男31例，女9例，年龄40～80岁，平均年龄59.56岁。根据2002年AJCC的分期标准：TNM I期12例，II期11例，III期10例，IV期7例。其中高分化10例，中分化19例，低分化11例。术后证实无淋巴结转移25例，有淋巴结转移15例。另外选取30例声带息肉作为对照组。

1.2 方法 所有标本均经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，3μm厚连续切片。参考说明书操作：石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，高压抗原修复，3%过氧化氢阻断后，分别加入鼠抗人PTEN单抗、鼠抗人PCNA单抗，4 ℃过夜后，加二抗，DAB显色，苏木精复染，常规脱水，中性树脂封片。以已知阳性片为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。鼠抗人PTEN单克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体、SP试剂盒及DAB底物显色剂购自北京中杉金桥生物有限公司。

1.3 结果判断 PTEN蛋白和PCNA表达产物均主要定位于细胞核。每张切片随机选取5个高倍视野，由同一位医师用显微镜进行细胞计数。按染色强度及阳性细胞数所占百分比综合计分。染色强度：无色计为0分，淡黄色计为1分，棕黄色计为2分，棕褐色为3分;阳性细胞数：<5%时计为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。染色强度得分与阳性细胞数得分相加，0分计为(-)，1～3分计为弱阳性(+)，4～5分计为中度阳性(++)，6分计为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理方法 采用x2检验，并作Pearson相关分析。

2 结果

2.1 PTEN在喉癌中的表达 PTEN蛋白表达产物定位于细胞核，呈棕黄色或棕褐色均匀颗粒(见图1)。PTEN在喉鳞癌组织中阳性表达率为52.5%(21/40)，对照组为93.3%(28/30)，差异有显著性(x2=13.611，P <0.05)。喉鳞癌中PTEN的表达与病理分级、临床分期及淋巴结转移之间有相关(均P<0.05)，而与患者年龄、临床分型无关(P >0.05)，见表1。

2.2PCNA在喉癌的表达 PCNA阳性表达产物定位于细胞核，呈棕黄色或棕褐色颗粒(见图2)。在40例喉鳞癌中， PCNA阳性表达率为77.5%(31/40)，在声带息肉中阳性表达率为16.7%(5/3