CXCR7在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

作者            作者单位

王永霞  海南医学院热带医学与检验学院

陈钟    厦门口腔医院口腔颌面外

裴华    海南医学院热带医学与检验学院

饶朗毓　海南医学院热带医学与检验学院

[ABSTRACT] Objective： To explore the expression of CXCR7 in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and to evaluate the expression of CXCR7 and the clinicopathology factors of OSCC. Methods： CXCR7 protein expression and its relation to clinico-pathological features of OSCC were examined in 20 normal oral tissues and 48 OSCC by immunohistochemical SP methods. Results： The overexpression rate of CXCR7 in OSCC was 81.2%(39/48)，which was significant higher than that of the control group 25%(5/20) (P<0.005); The overexpression of CXCR7 among the lower differentiated tissues were significant higher than the middle/ higher differentiated tissues of OSCC (P<0.05) ， and the findings were similar among the groups of the Ⅲ、Ⅳ clinical stages than Ⅰ、Ⅱ clinical stages， and lymph node involvement than the non- lymph node involvement of OSCC(P<0.05). Conclusion： The overexpression of CXCR7 might be play an important role in the pathogenesis and development of OSCC， and it might be a target for the therapy and prognostic indicator of OSCC.

[KEY WORDS] CXCR7; Oral squamous cell carcinoma; Immunohistochemical; Overexpression;

口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，极易向颈部淋巴结转移，侵袭力较强。趋化因子受体属于G蛋白耦联跨膜受体，通过与其配体结合发挥多种生物学功能，如促进细胞生长、发育、分化、凋亡等[1] 。近年来研究表明，趋化因子及其配体网络对肿瘤细胞的发生和转移起重要作用。CXCR7是新近发现的一种趋化因子受体，配体为CXCL12。研究证明CXCR7在乳腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌等常见恶性肿瘤中高表达，且与肿瘤的侵袭和转移密切相关。但关于CXCR7在口腔鳞癌中的表达及其与颈部淋巴结转移的关系尚未见报道。本研究采用免疫组织化学染色法检测CXCR7在口腔鳞癌中的表达及与颈部淋巴结转移的关系，探讨其在口腔鳞癌发生、发展中的作用。

1　材料与方法

1.1　标本来源

48例口腔鳞癌(OSCC)组织标本来自2004～2010年厦门口腔医院口腔颌面外科手术切除的标本，术后均经病理诊断证实为高、中、低分化口腔鳞癌，男性29例，女性19例;年龄30～74岁，平均49.3岁;有颈部淋巴结转移者31例，无颈部淋巴结转移者17例;肿瘤直径：≤3cm 21例，>3 cm 27例;病理分级：中、高分化16例，低分化32例;TNM分期：Ⅰ、Ⅱ 期 19例，Ⅲ、Ⅳ期29例。 所有病例术前未接受放疗、化疗。另取20例外伤或门诊拔牙患者的正常口腔黏膜作为正常对照。所有标本均经4%多聚甲醛液固定，常规石蜡包埋，制成4 μm厚连续切片。

1.2　 主要试剂

兔抗人CXCR7多克隆抗体购至美国Abcam公司;免疫组化超敏SP染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购至武汉博士德生物科技公司。

1.3　实验方法

石蜡切片经二甲苯、梯度酒精脱蜡至水，以柠檬酸盐缓冲液高温高压修复抗原，自然冷却至室温，H2O2阻断内源性过氧化物酶，正常非免疫兔血清封闭20 min。随后滴加一抗，37℃孵育1 h，以PBS代替一抗作为阴性对照，已知的阳性OSCC标本作为阳性对照;PBS漂洗3次，滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30 min，PBS漂洗3次;滴加链霉亲和素-过氧化物酶溶液，37℃孵育15 min，PBS漂洗3次;DAB显色，蒸馏水漂洗;苏木素复染，脱水，透明，封片。

1.4　免疫组化结果判断

CXCR7阳性表达主要定位于细胞浆和细胞膜，少数定位于细胞核，呈棕黄色颗粒。采用双盲法统计结果，随机选取5个高倍视野(×400)计数，统计阳性细胞所占的百分比，根据阳性细胞百分比将染色结果分为4个等级：阳性细胞≤5%为 (-);6%～25%为(+);26%～50%为(++); >50%为(+++)，(-)及(+)归为不表达组或低表达组，(++)及(+++)归为高表达组。

1.5　统计学处理

应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，计数资料比较采用χ2检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

2 　结果

2.1 　MAT1蛋白在口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织中的表达情况

CXCR7主要表达于口腔鳞癌组织，棕黄色颗粒主要局限于细胞浆和细胞膜，少数定位于细胞核。CXCR7在口腔鳞癌组织中高表达(图1)，在正常口腔黏膜组织中不表达或仅有微弱表达(图2),2种组织中CXCR7的高表达率分别为81.2%(39/48)和25.0%(5/20)。在这些标本中，31例发生颈淋巴结转移的患者中有28例淋巴结转移灶中CXCR7高表达，高表达率为90.3%。口腔鳞癌组织中CXCR7高表达率与正常口腔黏膜相比差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。图1 CXCR7在口腔鳞癌图2 CXCR7在正常口腔组织中的表达(×400)黏膜组织中的表达(×400)

2.2　MTA1蛋白表达与口腔鳞癌临床病理特征的关系

肿瘤直径>3 cm组CXCR7高表达率稍高于≤3cm组，但差异无统计学意义(P>0.05);低分化组CXCR7高表达率显著高于中、高分化组，差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ期与Ⅰ、Ⅱ期相比，有淋巴结转移组与无淋巴结转移组相比CXCR7高表达率均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。表1　CXCR7在口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织中的表达 表2 CXCR7表达与OSCC临床病理特征的关系

3　讨论

CXCR7是一个新发现的基质细胞衍生因子-1(stroma-cell drived factor 1，SDF-1)受体，能与SDF-1(CXCL12)结合发挥生物学作用。CXCR7主要表达于肿瘤细胞系、激活的内皮细胞及胎肝细胞等，而正常细胞很少表达。研究证实 CXCR7能促进肿瘤生长、血管生成及细胞间黏附，参与了肿瘤的发生、侵袭与转移[2,3]。Iwakiri等[4]通过对Ⅰ期非小细胞肺癌患者的临床研究中发现，高表达CXCR7的患者术后远处转移率显著高于低表达CXCR7的患者(P=0.007)，并且高表达CXCR7组5年无瘤生存率显著低于低表达组(P=0.033)。目前研究显示， CXCR7与乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌、肝癌、 胰腺癌等恶性肿瘤的发生、发展密切相关[5-7]。但CXCR7在肿瘤中的作用机制还不是很清楚，Wang 等[5] 研究 CXCR7 在前列腺癌中的作用时发现，CXCR7可能通过激活AKT信号通路和调节前血管形成因子白细胞介素-8( IL-8) 或血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控肿瘤的发生、发展;并认为CXCR7还可调节细胞间黏附分子(FN1、CDH11和CD44)及基质金属蛋白酶如MMP3、MMP10等的水平，增强肿瘤细胞的侵袭与转移。Barbero 等[8]发现CXCR7还能通过活化ERK1 /2信号通路诱导胶质瘤细胞的增殖。这些研究均表明CXCR7能通过多种途径增强肿瘤细胞的侵袭性及转移性。

目前， 关于口腔鳞癌中 CXCR7 的生物学功能报道较少，本研究采用免疫组织化学法检测了48例口腔鳞癌组织和20例正常口腔黏膜标本中CXCR7的表达情况，发现CXCR7在口腔鳞癌组织中高表达，与正常口腔黏膜相比差异有统计学意义(P<0.05);通过对口腔鳞癌组织临床病理特征与CXCR7表达的相关性研究发现，CXCR7高表达与癌组织分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移关系密切，而与肿瘤的大小无明显关系，CXCR7高表达于口腔鳞癌组织中的低分化组、临床分期Ⅲ、Ⅳ期组及有淋巴结转移组，与中/高分化组、临床分期Ⅰ、Ⅱ期组及无淋巴结转移组相比，差异有统计学意义(P<0.05)，说明CXCR7的表达参与了口腔鳞癌的发生、发展及浸润转移，这为进一步阐明口腔鳞癌发生、发展的分子机制提供了参考依据，对判断肿瘤的生物学行为和预后有重要意义，还可为临床医生选择最佳治疗方案提供参考;同时，研究如何抑制CXCR7的表达及抑制其表达产物的生物学活性有可能成为将来治疗肿瘤的新方法。但CXCR7是通过何种信号通路影响口腔鳞癌细胞的生物学特性以及与其他趋化因子网络的关系如何，具体机制仍不清楚，尚需进一步阐明。

【参考文献】

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3　Miao Z H， Luker KE， Summers BC ， et al . CXCR7 ( RDC1 ) promotes breast and lung tumor growth in vivo and is expressed on tumor associated vasculature[J] .P roc Natl Acad Sci USA， 2007 ， 104 ( 40)： 15735- 15740 .

4　Iwakiri S， Mino N， Takahashi T， et al. Higher expression of chemokine receptor CXCR7 is linked to early and metastatic recurrence in pathological stage Ⅰnon-small cell lung cancer[J]. Cancer， 2009， 115(11)： 2580-2593.

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