两种制作寄生虫虫卵长期性玻片标本新方法介绍

姓名               作者单位

邹艳      湖南中医药高等专科学校,湖南株洲,412012

丘继哲    湖南中医药高等专科学校,湖南株洲,412012

黄旭      湖南中医药高等专科学校,湖南株洲,412012

徐妮为    湖南中医药高等专科学校,湖南株洲,412012

迄今为止,寄生虫虫卵玻片标本的制作大多采用石蜡圈法、双层盖片封片法或甘油明胶封片法。其制作的虫卵玻片标本不足之处是:石蜡圈法因受气温的变化,蜡圈易变形,而影响标本质量;双层盖片封片法由于虫卵不能浸泡在虫卵固定液中,标本易发生干涸,不利于长时间保存;甘油明胶封片法所制标本因虫卵透明而结构略有失真。近年有人采用滤纸打孔凡士林封边或桃胶封边及清漆封边法制片,虫卵因处于水溶液而结构完整,但操作繁琐。作者在长期的实验教学标本制作实践中摸索出两种虫卵标本制作方法的改进技术,现介绍如下。

1 　琼脂糖为介质水溶性虫卵玻片法

1. 1 　材料　常规收集寄生虫虫卵经5 %甲醛固定后离心浓缩待用。

1. 2 　制备介质　取进口分装琼脂糖粉分别配制1 %、1. 5 %和2 %水溶液。配制时将琼脂糖粉于额定的蒸馏水中隔水煮沸15min 后加入少许甲醛,依虫卵的不同,在琼脂糖液中加入2～10 ml 甘油。

1. 3 　制作过程　用小镊子挑取少许玻璃碎渣于载玻片上(既避免虫卵受压又利于观察时寻找焦平面) ,再用毛细吸管吸取一小滴虫卵液(含虫卵约10 个) 于玻璃渣上,然后用另一吸管吸取一滴介质(介质置一小三角烧瓶中隔水加温) 于虫卵上,迅速盖上小盖玻片(10 mm ×10 mm) ,待介质凝固后,滴树胶加盖玻片(20 mm ×20 mm) 即可。

1. 4 　注意事项　虫卵的不同,所采用的介质浓度也应各异:1 %琼脂糖液98 ml 加2 ml 甘油适用于姜片吸虫卵、并殖吸虫卵、绦虫卵、钩虫卵及蛲虫卵的封片。1. 5 %琼脂糖液95 ml 加5 ml 甘油适用于华支睾吸虫卵、日本血吸虫卵、受精及未受精蛔虫卵与鞭虫卵的封片。2 %琼脂糖90 ml 加入10 ml 甘油适用于三属蚊卵的封片。

2 　蜡圈、蜡纸单层盖玻片法

2. 1 　制作材料　常规方法已固定的各种寄生虫虫卵悬液;直径为11 mm 玻璃离心管1 支;直径为6. 14 mm ,长10 cm 空心金属打孔器1 支;切片石蜡适量(取熔点为60～62 ℃1/ 3 ,56～58 ℃2/ 3 混合,加热溶解后冷却) ;刻钢板:蜡纸;载玻片(25. 4mm ×76. 2 mm) 、盖玻片(18 mm ×18 mm) ;中性树胶(上海标本模型厂出产) 。

2. 2 　制作方法　用金属打孔器将蜡纸制成内、外径分别为6. 14 mm 纸圈备用;将离心管口在酒精灯火焰上适当加热后,蘸取已热溶的石蜡扣于载玻片中央使成一蜡圈,待其凝固;将已凝固蜡圈载玻片在酒精灯火焰上适当加热至蜡溶解为宜;用镊子夹取蜡纸圈1 个,平放入已溶解的蜡圈中,待冷却整平;滴加已固定好的虫卵悬液1～2 滴,加盖盖玻片,用普通滤纸吸去盖玻片四周溢出的溶液;用中性树胶封盖片四周,制成标本。封片后应及时将玻片标本放入冰箱(2～10 ℃) 内15～20 min ,使中性树胶表层在短时间内凝固,以避免树胶中二甲苯为石蜡溶剂渗入至蜡圈,而影响标本质量,亦是标本制作的关键。

3 　结果与讨论

作者应用此两种方法制作10 余种寄生虫虫卵玻片标本用于实验教学,效果良好。琼脂糖作为介质用于寄生虫虫卵的封片,其网络效果好,避免了虫卵滑动,且无色透明,既不影响虫卵的观察,又不与树胶发生理化反应,明显优于明胶介质。蜡圈、蜡纸单层盖玻片法具有以下特点:1) 制成的标本其蜡圈规格一致,蜡圈不易产生变形,便于学生镜下观察;2) 应用蜡纸圈为垫,可使圈内形成一层薄厚适宜的空间以容纳虫卵,且虫卵浸泡在蜡圈内固定液中,可保持虫卵形态典型;3) 用本法制作的标本保存时间长,可保存5 年甚至更长。用这两种方法制作的标本,可以使虫卵保持原来的形态及色泽,清晰可见,易于辨认,不易出现气泡、空隙和发霉,可长期保存;还避免了虫卵因透明而结构失真和卵壳干瘪等现象。虫卵保持在原固定液中,结构完整清晰,标本外观美观。