HPLC测定艾芩止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量

艾芩止咳颗粒是北京中医药大学附属东直门医院姜良铎教授多年临床经验方。由艾叶、黄芩、炙麻黄、全瓜蒌、椒目、炒杏仁、甘草7味药组成,功效散寒止咳、清肺化痰,用于风寒犯肺,肺经痰热,咳嗽有痰、或白或黄等症。
麻黄为本方中的君药,故以麻黄碱为指标进行含量测定,控制成品的质量。2010版《中华人民共和国药典》(一部)采用高效液相色谱法(HPLC)测定麻黄碱的含量[1],操作更为简便,方法可靠,重复性好,故本研究参照该方法测定麻黄碱的含量。
1 仪器与试药
Waters2695高效液相色谱仪(Waters2695联盟系统,Waters2996二极管阵列检测器,Mellennium32色谱工作站);KQ-250DB昆山超声波清洗器(北京顺杰科技有限公司)。盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号0714-9903);乙腈为色谱纯,水为纯净水,磷酸等其他试剂均为分析纯。艾芩止咳颗粒(药材由河北光明饮片有限公司提供,北京师范大学资源学院教育部资源药物工程研究中心制备,批号040704、040712、040722)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(10∶90),检测波长 210 nm,流速 1 mL/min,柱温30 ℃,进样量10 μL。理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸麻黄碱对照品3.57 mg置25 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取3 mL,置10 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得(盐酸麻黄碱每1 mL中含42.84 μg)。
2.3 供试品溶液的制备
取本品装量差异项下的内容物,研细,取1.0 g,精密称定,置100 mL具塞锥形瓶中,加入水30 mL和氨水2 mL,超声30 min (功率250 W,频率50 kHz),置分液漏斗中,加乙醚萃取4次,每次20 mL,合并乙醚液,挥去乙醚,残渣用甲醇约5 mL分次溶解并移至25 mL量瓶中,流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按成品制剂方法制得缺麻黄的阴性样品制剂。取阴性样品制剂,研细,取约1.0 g,精密称定,按供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。
2.5 系统适用性试验
按上述色谱条件分别测定样品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液,见图1。结果表明,盐酸麻黄碱对照品与艾芩止咳颗粒中盐酸麻黄碱的保留时间基本一致,阴性供试品溶液在相应位置处无相应的峰出现,同时与其他组分分离完全,分离度为2.2,理论塔板数以盐酸麻黄碱峰计算应不低于3 000。ABC注：A.对照品;B.供试品;C.阴性对照;1.盐酸麻黄碱图1 艾芩止咳颗粒HPLC图
2.6 线性关系考察
精密称取盐酸麻黄碱对照品3.57 mg,置25 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取3 mL,置10 mL量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。再分别精密自动吸取此溶液3、5、7、10、13、15、18 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以对照品进样量(μg)对峰面积的积分值进行线性回归,结果表明,盐酸麻黄碱进样量在0.13～0.77 μg范围内与峰面积线性关系良好,其线性回归方程为：Y=3 156 280X-48 056,r=0.999 92。
2.7 精密度试验
取同一供试品溶液(批号040704),同法连续测定5次,测定盐酸麻黄碱对应的色谱峰峰面积,计算其RSD=0.11%,表明本方法精密度良好。
2.8 稳定性试验
取同一供试品溶液(批号040704),按0、2、4、6、8 h时间间隔,分别测定峰面积,结果表明,供试品溶液制备后8 h内测定,色谱峰面积无明显变化,RSD=1.08%,表明在此时间内供试品化学性质稳定。
2.9 重复性试验
取6份样品(批号040704),平行操作,测定盐酸麻黄碱的含量,计算其RSD=2.32%,表明本方法重复性良好。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品5份(批号040704),每份0.4 g,置100 mL具塞锥形瓶中,精密加入盐酸麻黄碱对照品0.386 4 mg,按“2.3”项下方法制成供试品溶液,按上述色谱条件进样,测定含量,并计算样品的回收率,结果见表1。表1 盐酸麻黄碱加样回收率试验结果
2.11 含量测定
取3个批次的艾芩止咳颗粒,按“2.3”项下方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪,依法测定3批样品中盐酸麻黄碱的含量,结果见表2。表2 艾芩止咳颗粒中盐酸麻黄碱的含量测定结果
3 讨论
本试验采用HPLC测定盐酸麻黄碱含量时考察了以下几种流动相系统[2-5]：甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾(磷酸调pH至2.5)溶液(4∶96)、乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(含0.2%三乙胺,磷酸调pH至2.7,5∶100)、乙腈-0.1%磷酸溶液(6∶94)、乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(10∶90),其中以乙腈-0.025 mol/L磷酸溶液(10∶90)系统的色谱峰对称性好,供试品中所测组分分离度好,没有杂质干扰。
在供试品溶液制备上,加入少量氨水溶液,碱性条件下,水超声提取,并对超声提取时间20、30、40 min进行了试验,结果30 min提取完全,同时乙醚萃取4次,挥干乙醚溶液,甲醇溶解残渣,作为样品制备的方法。提取效果优于2010年版《中华人民共和国药典》(一部)中的酸性条件提取,便于测定。
本试验建立的HPLC方法用于盐酸麻黄碱的含量测定,色谱分离和线性关系良好,重复性及回收率均符合要求,为制订本品的质量控制指标提供了准确、灵敏、稳定和快速的方法。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社,2010：301.
[2] 聂明华,曾芳俐.高效液相色谱法测定鼻嗅通喷雾剂中盐酸麻黄碱的含量[J].中国医院药学杂志,2007,27(2)：281-282.
[3] 莫少红,陈晓军,邓向东,等.HPLC测定桔远止咳片中盐酸麻黄碱的含量[J].中成药,2004,26(3)：201-203.
[4] 王林丽,陈亮,付若秋,等.HPLC法测定抗病毒口服液中盐酸麻黄碱的含量[J].中国药房,2007,18(15)：1166-1167.
[5] 郭德铭,蒋琼,陈波.HPLC测定小儿化痰止咳颗粒中的盐酸麻黄碱[J].华西药学杂志,2008,23(5)：598-599.