强肌健力饮对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用的实验研究

作者              作者单位

赵慧    广州中医药大学核医学教研室，广东广州

荣向路   广州中医药大学核医学教研室，广东广州

陈芝喜   广州中医药大学核医学教研室，广东广州

陈津岩   广州中医药大学核医学教研室，广东广州

李志强   广州中医药大学核医学教研室，广东广州

何赞厚  广州中医药大学核医学教研室，广东广州

强肌健力饮是著名中医药专家邓铁涛教授治疗重症肌无力的经验方。邓老认为重症肌无力多属脾胃亏虚，筋脉失养之本虚证，至中后期，往往脾虚损及肾，而表现为脾肾阳虚，故脾虚、肾虚是致病之本，因而固护、调节先后天之本是治疗本病的关键。根据该方的临床主治特点，我们分别从脾虚证、肾阳虚证着手，对该方进行了一系列的实验研究[1-4]，初步证明强肌健力饮可促进脾虚小鼠核酸和蛋白质合成，改善肾阳虚证大鼠肾上腺轴的水平，但针对该方对肾阳虚证性腺轴的影响结果尚未报道。本实验观察了该方对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴作用的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 清洁级SD大鼠，雄性，4月龄，体质量(200±20)g,由广东省医学实验动物中心提供，许可证号为粤监证字2006A015。大鼠在适应性喂养2d后，采用随机法将71只动物分为正常对照组10只，肾阳虚模型组13只，强肌健力饮低、中、高剂量组各12只，右归丸组12只。

1.2 药物及试剂 强肌健力饮由黄芪、党参、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮、甘草等组成(均购自广州致信药业，经中药学院张丹雁老师鉴定)，采用回流提取法，经过2次提取并收集挥发油，药液浓缩至3g/mL，4℃保存备用;右归丸购于北京同仁堂广州药业有限公司，批号6013022;氢化可的松注射液由扬州制药有限公司生产(批号：20060302);睾酮(T)、雌二醇(E2)放免试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供。

1.3 造模[5-6]与给药 肾阳虚模型组动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服蒸溜水2mL/d;正常对照组动物肌肉注射生理盐水1mL/d，同时灌服蒸馏水2mL/d;强肌健力饮低、中、高剂量组(即中药低、中、高剂量组，剂量分别为7.8、15.6、23.4g·kg-1·d-1)动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服相应剂量的强肌健力饮2mL/d;右归丸组动物肌肉注射氢化可的松25mg·kg-1·d-1，同时灌服右归丸(剂量为5.8g·kg-1·d-1) 2mL/d，均连续14d。

1.4 主要观察指标 造模灌药期间，每日观察动物的一般状态(包括饮食、毛发、精神、活动等)。于实验第15天(即最后1次给药16h后)眼球取血，离心，取上清液，-4℃保存待测;采用放射免疫分析法检测各组大鼠血清T、E2含量。然后处死大鼠，立即摘取下丘脑、睾丸称质量，计算各组脏器指数(w):w=m脏器/mbody。睾丸放入体积分数10%福尔马林液内固定过夜，然后包埋、切片、苏木素—伊红(HE)染色处理，做组织形态学观察。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 动物死亡原因 实验过程中因灌胃操作失误及造模所用药物损伤等原因引起肾阳虚模型组大鼠死亡1只，中药高剂量组死亡3只，右归丸组死亡1只，最终进入结果分析为66只。

2.2 各组脏器指数比较 表1结果显示，肾阳虚模型组大鼠下丘脑及睾丸指数与正常对照组比较均升高(P<0.05或P<0.01);而中药低、中、高剂量组和右归丸组的下丘脑指数显著降低，与肾阳虚模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)，睾丸指数无明显变化(P>0.05)。

2.3 各组大鼠血清T、E2水平的比较 表2结果显示，与正常对照组比较，肾阳虚模型组大鼠血清T含量显著下降，E2含量及E2/T比值显著升高(均P<0.01);而中药低、中、高剂量组T含量较肾阳虚模型组显著升高，E2/T比值显著降低(均P<0.01)，但E2含量无明显变化(P>0.05)。而且强肌健力饮的作用与右归丸相仿。 表1 各组大鼠脏器指数比较统计方法：t检验;①P<0.05，②P<0.01，与正常对照组比较;③P<0.01，与肾阳虚模型组比较表2 各组大鼠血清性激素水平的比较统计方法：t检验;①P<0.01，与正常对照组比较;②P<0.01，与肾阳虚模型组比较

2.4 各组大鼠睾丸的组织形态学观察 肾阳虚模型组大鼠睾丸曲精小管内精细胞体积小于正常对照组，精原细胞核染色质和初级精母细胞核染色体不明显。中药低、中、高剂量组睾丸曲精小管内精细胞体积明显大于肾阳虚模型组，精原细胞核染色质和初级精母细胞核染色体比较显著。右归丸组睾丸组织未见明显变化。结果见图1。a.正常对照组b.肾阳虚模型组c.中药低剂量组

3 讨论

本实验选用国内目前较为经典的氢化可的松法复制“肾阳虚”证动物模型。模型组大鼠于实验第5天开始出现竖毛、身体蜷缩、扎堆，眼睛半眯、小便次数多等现象，第11～14天肾阳虚症状更加明显：体质量减轻，毛发枯燥松弛、肢冷，身体瘦削、喜蜷缩扎堆、目光无神，反应迟钝，少动、眯眼或闭眼，行动迟缓，叫声低而无力，饮食和饮水量减少，小便次数及小便量均增多，与中医肾阳虚证的症状特点相似。而应用右归丸灌服的动物,其肾阳虚症状较肾阳虚模型组有所改善,表明右归丸对肾阳虚证大鼠有一定的保护作用,这与肾阳虚证的理法方药相吻合。

重症肌无力是一种难治性疾病，现代医学多采用抗胆碱酯酶、免疫抑制等治疗，然而副作用大，停药后易复发。邓铁涛教授认为本病多属脾胃亏虚，筋脉失养之本虚证。脾为后天之本，主四肢肌肉、主运化;胃主受纳，脾胃虚弱，气血生化不足，无以生肌，四肢不得禀水谷之气，故出现四肢肌肉萎缩，肌肉无力。肾为作强之官，主骨生髓。脾虚及肾，又可出现四肢肌肉萎缩、肢体无力，骨枯髓虚，形削肉萎，腰脊四肢痿软无力。本方通过补脾而滋肾，先后天相互资生和促进，脾阳赖肾阳温煦而生化精微，肾阳赖脾之滋养而充盛，调整机体阴阳平衡，增强机体免疫力和抗病能力。临床应用强肌健力饮治疗脾胃虚弱型萎证疗效确切[7]。

中医认为肾藏精，主生殖，是生长、发育功能的枢纽，而肾中阳气是生殖机能的主要动力来源，因而性激素的水平反映了肾气的盛衰，性激素内环境的改变是肾虚发生和发展的重要物质基础。临床肾虚患者多伴随性激素水平的变化，研究发现[8]：肾阳虚证中老年人存在严重的性激素紊乱，表现形式是男性T值显著降低，E2/T比值、E2值显著升高，显示了肾阳虚证存在下丘脑—垂体—性腺轴的功能减退。从临床角度提示调整E2/T比值，保持E2与T之间的平衡是治疗肾阳虚证的关键及药物疗效的判定标准之一。本实验结果显示：肾阳虚模型组大鼠血清T含量下降，E2含量与E2/T比值升高(均P<0.01)，这与临床的结论一致。服用强肌健力饮低、中、高剂量中药复方后，能使T含量显著升高，E2/T比值降低(均P<0.01)，但E2含量无明显变化(P>0.05)。而强肌健力饮疗效与右归丸相仿[9]，提示该方能使肾阳虚证性腺轴上紊乱的激素水平得到调节。

睾酮是人体最重要的雄激素，由睾丸间质细胞分泌。生理状态下，下丘脑接受神经系统其他部分传来的信息，引起促性腺激素释放激素(GnRH)的释放，GnRH被运送至腺垂体，促使促卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)的释放，LH能刺激睾丸间质细胞的发育并分泌睾酮。本研究结果显示，肾阳虚模型组T水平下降的同时，下丘脑、睾丸指数反而升高，可能是由于机体在激素刺激下的代偿性反应，同时中药复方组能使下丘脑指数下降，说明强肌健力饮通过调整下丘脑中枢神经的变化，进一步影响睾丸性激素的分泌。形态与功能变化相关而同步，灌服低、中、高剂量强肌健力饮后，大鼠睾丸曲精小管内精细胞体积明显大于肾阳虚模型组，精原细胞核染色质和初级精母细胞核染色体比较显著。

综上分析，强肌健力饮通过改善下丘脑质量，影响中枢神经功能，进一步调节睾丸分泌性激素水平，同时使睾丸病理损伤得以修复，从而调节下丘脑—垂体—性腺轴的变化，这可能是该方防治氢化可的松所致肾阳虚大鼠的作用机制之一。

【参考文献】

[1]陈芝喜，徐志伟，刘小斌，等. 强肌健力口服液对脾虚小鼠DNA 合成的影响[J].中国临床康复，2006，10(15)：141.

[2]陈芝喜，徐志伟，刘小斌，等. 强肌健力口服液对脾虚小鼠蛋白质合成的影响[J].中国临床康复，2006，10(35)：97.

[3]陈芝喜，徐志伟，刘小斌，等. 强肌健力口服液对脾虚小鼠RNA 合成的影响[J].中国临床康复，2006，10(43)：129.

[4]赵慧，陈芝喜，陈津岩，等. 强肌健力饮对肾阳虚大鼠CRH、ACTH、Cor水平的影响[J].放射免疫学杂志，2007，20(4)：324.

[5]陈小野.实用中医证候动物模型[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993：100.

[6]邝安堏.某些助阳药对于大剂量皮质激素所致耗竭现象的影响[J].中华内科杂志，1963(2)：113.

[7]刘小斌，邓中光.强肌健力口服液治疗脾胃气虚型重症肌无力的临床观察[J].中药新药与临床药理，2004，15(5)：361.

[8]方素钦，吴圣贤.中老年人肾虚证与性激素及免疫功能的研究[J].福建中医药,2002，33(2)：1.

[9]刘天成，崔撼难. 右归丸对肾阳虚大鼠下丘脑—垂体—性腺轴影响的实验研究[J].吉林中医药，2007，27(4)：56.