不同炮制方法对亳白芍中芍药苷含量的影响

作者                      作者单位

吴剑坤        首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010

毛克臣        首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010

庄志宏        首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010

黄健          首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010

陈志峰        首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010

白芍为毛茛科植物芍药(Paeunia lactiflora Pall.)的去外皮干燥根。性微寒,味苦、酸,归肝、脾经,具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗的功能,用于治疗头痛眩晕、胁痛、腹痛、四肢挛痛、血虚萎黄、月经不调、自汗、盗汗等[1]。白芍的主要化学成分为芍药苷、牡丹酚、芍药花苷、芍药内酯、苯甲酸等;此外,还含有挥发油、脂肪油、树脂糖、淀粉、黏液质、蛋白质和三萜类成分[2]。其中芍药苷是其主要活性成分,又是中药饮片白芍质量标准的标定成分[3]。亳白芍历来是道地药材之一,由于炮制加工方法不同其芍药苷含量变化较大。笔者以芍药苷为指标,采用HPLC法对亳州产白芍4种不同炮制方法芍药苷的含量进行了测定,为稳定白芍的炮制工艺积累资料。

1 仪器与试药

Agilent 1200 高效液相色谱仪,包括Agilent G1311A四元泵(Quatpump)、Agilent G1322A真空在线脱气机(Degasser)、Agilent G1329A自动进样器(ALS)、Agilent G1315D DAD检测器、Agilent 1200化学工作站;Agilent G1316A(TCC)柱温箱;KH-500SP双频数控超声波清洗器(功率500 W±30%,频率25 kHz、40 kHz±10%,昆山市禾创超声仪器有限公司);AL204型电子天平(METTLER TOLEDO)。

芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所,批号110736-200424;白芍为亳州产白芍。乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86);流速：1.0 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：230 nm。进样量为10 μL。色谱柱的理论板数按芍药苷峰计算为7 465。在此条件下,芍药苷与其他组分均能达到基线分离。色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液,即得。

2.3 供试品溶液的制备

取生品与不同炮制品粉末各约0.1 g,精密称定,置50 mL容量瓶中,精密加入50%(mL/mL)稀乙醇35 mL,称定重量,超声处理30 min,放冷,加50%(mL/mL)稀乙醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4 切制工艺、成品外观

样品1：于8-10月采挖、洗净、除去头尾及细根,置沸水中煮后,取出,除去外皮,硫磺熏,晒干。切片前加水闷润至内外湿度一致,折断面无干心,取出,晾至软硬适宜,硫磺熏,切薄片,晒干。外观为类圆形或椭圆形薄片。直径1～2.5 cm。外表皮类白色或淡红棕色。切面平显光泽,类白色或微带红棕色,有明显的形成层环和放射纹理。质坚脆。气微,味微苦、酸。样品2：于8-10月采挖、洗净、除去头尾及细根,置沸水中煮后,取出,除去外皮,硫磺熏,晒干。切片前加水闷润至内外湿度一致,折断面无干心,取出,晾至软硬适宜,切薄片,晒干。外观为类圆形或椭圆形薄片。直径1～2.5 cm。外表皮灰白色或淡红棕色。切面平坦不光亮,灰白色或微带红棕色,有明显的形成层环和放射纹理。质坚脆。气微,味微苦、酸。样品3：于8-10月采挖、洗净、除去头尾及细根,置沸水中煮后,取出,除去外皮,晒至内外湿度一致。折断面无干心,软硬适宜,切薄片,晒干。外观为类圆形或椭圆形薄片。直径1～2.5 cm。外表皮灰白色。切面粗糙不平坦,片形卷曲呈灰白色,可见明显的形成层环和放射纹理。质坚脆。气微,味微苦、酸。样品4：于8-10月采挖、洗净、除去头尾及细根,晒至内外湿度一致。折断面无干心,软硬适宜,切薄片,晒干。外观为类圆形或椭圆形薄片。直径1～2.5 cm。外表皮灰白色。切面粗糙不平坦,片形卷曲呈灰白色,可见明显的形成层环和放射纹理。质坚脆。气微,味微苦、酸。

2.5 加样回收率试验

采用加样回收法,精密称取以测定含量的同一样品6份,各0.05 g,分别加入芍药苷对照品,按供试品溶液的制备方法制备供试液,进样,记录色谱图,计算回收率。平均回收率为99.195%,RSD=0.8%。见表1。表1 加样回收率试验结果

2.6 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品(样品1～4)溶液各10 μL,注入液相色谱仪,按“2.1”项下色谱条件测定,样品含量按干燥品计算。结果见表2。表2 芍药苷含量测定结果

3 讨论

通过试验观察,在白芍的炮制过程中,加热、加水浸泡,或硫磺熏对芍药中芍药苷的含量影响较大。通过对4种不同炮制方法切制出的白芍饮片成品的比较：经过加热水煮、硫磺熏后切制出来的成品芍药苷含量低,其外观符合鉴别特征。而加热水煮和不用硫磺熏切制出来的成品,均显示出芍药苷含量高,但不具有外观鉴别特征。

在白芍的加工炮制过程中,要严格控制加水煮、水浸泡的时间,以减少芍药苷的损失。中药饮片在传统的加工过程中,使用硫磺熏是比较常见的方法,尽管其具有保鲜、防霉变的效果,且饮片成品的颜色美观,又不易生虫,但饮片中硫的残留物对人体是有害的,应避免使用。

【参考文献】

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.68-69.

[2] 高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社,2002.542.

[3] 北京市药品监督管理局.北京市中药饮片炮制规范(上册)[S].2008.78