板蓝根与抗内毒素药效作用及化学基础研究

板蓝根是十字花科植物菘蓝的根，是临床上常用的清热解毒的中药，具有抗菌、抗病毒、抗癌、增强免疫力、抗细菌内毒素等多种功能[1]。肿瘤坏死因子TNF-α、白细胞介素-6（IL-6）等，进而引起机体发热、休克、血管内弥散性凝血等反应，对患者造成严重的损伤，甚至死亡。以小鼠腹腔巨噬细胞作为对象，研究板蓝根对LPS刺激产生TNF-α和IL-6的作用，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：①试剂：板蓝根购于辽宁中医药大学中药房， LPS（湛江安度斯生物有限公司，010203），小鼠TNF-αELISA 试剂盒（江莱生物科技有限公司，货号：ELISA2266），小鼠IL-6 ELISA试剂盒（上海沪鼎生物科技有限公司，HD- 30163k）。②实验动物：周龄4周的昆明小鼠，20 g左右，雌雄各15只，均购于北京维通利华有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞的制备：给予昆明小鼠腹腔注射2 mg/ 只BCG，4 d后经过脱颈椎处死小鼠，给小鼠腹腔注射5 ml含有 100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素和10 U/ml肝素的RPMI160 （GIBCO）培养液，轻柔腹部，抽取腹腔液体，1 500 r/min， 5 min，用RPMI160洗涤细胞两次，接种于含10%胎牛血清（Hyclone）的RPMI160培养液，于37℃，5% O2，95% CO2的培养箱（Thermo）中进行培养2 h，洗去未贴壁的细胞，剩下的贴壁细胞即为巨噬细胞。

1.2.2 板蓝根溶液的配置：取100 g板蓝根置于700 ml蒸馏水煎煮 1.5 h，滤渣加500 ml蒸馏水继续煎煮1 h，过滤，将所有滤液浓缩至100 ml。

1.2.3 分组处理：取2×106个细胞/ml至于24孔板，随机分为两组，5孔/组，其中板蓝根组每孔加1 ml板蓝根处理细胞1 h，然后加LPS至终浓度50 ng/ml，对照组不加板蓝根预处理，直接加LPS 处理，24 h后，取上清液用ELISA检测TNF-α和IL-6的含量，抑制率=（1－板蓝根处理组含量/对照组含量）×100%。

1.3 统计学处理：使用SPSS 17.0对各项资料进行统计、分析，各项参数以均数±标准差（ s x ± ）表示，采用t和χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果板蓝根对LPS致鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响见表1。与对照组相比，板蓝根处理组的TNF-α的量明显下降（t=5.818，P=0.000）；与对照组相比，板蓝根处理组的IL-6的量明显下降（t=26.464，P=0.001）。

3 讨论板蓝根可治疗感染性热疾病，因其药理作用可能为抗炎、抗病毒、抗微生物感染等，近些年有人对中医的热毒进行了新的诠释，认为内毒素是一种热毒，抗内毒素可能是板蓝根解热的一种机制。据报道细菌内毒素对人体的危害很大，其作用于靶细胞引起机体广泛的病理生理反应，如发热、炎性反应、休克等，主要机制是脂多糖与其受体结合，通过蛋白激酶的活化，刺激单核巨噬细胞释放多种炎性因子，如TNF-α、IL-6和NO等。临床上内毒素导致疾病的主要途径就是诱导细胞因子和炎性反应介质的释放，因此对炎性反应因子的检测可以作为内毒素性疾病治疗的指标。本实验中，给予昆明小鼠腹腔注射BCG，促使T细胞活化后激活巨噬细胞，进而对对LPS的敏感性增强，使其能过产生足够高水平的TNF-α和 IL-6，然后使用板蓝根溶液对其进行预处理，再给与LPS刺激，24 h 后检测TNF-α、IL-6的含量，显示与对照组相比，板蓝根处理组的 TNF-α、IL-6的含量明显降低（P＜0.05），抑制率分别为63.67% 和74.12%，与以前的报道相仿。板蓝根抗内毒素作用效果明显。

4 参考文献

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:143.