复方抗溃疡药物的药效学研究

1　实验材料

1.1　实验动物

BALBIC小鼠80只，15-25g，雌雄各半，由北京军事医学科学院提供，合格证号SCXK-(军)2002-001沙土鼠80只，60±2g，全部为雄性，由首都医科大学提供，合格证号SCXK(京)2005-0006

1.2　药品

受试药品：甲硝唑、四环素、果胶铋、枸橼酸铋。以0.5%CMC-Na配成所需浓度备用。

1.3　试剂

甲醛氨苄青霉素钠溶液CMC-Na溶液

1.4　实验仪器

特制鼠板电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司解剖显微镜 芜湖光学仪器厂

2　实验方法

2.1　复方抗溃疡药组方正交实验

取6-8周龄BALBIC小鼠，将浓度为 0.25g/ml 氨苄青霉素加入1000ml凉开水[5]，喂养小鼠，每天换饮水1次，连续16天(目的：杀灭小鼠胃内可能影响试验的杂菌)。取巴比西小鼠雌雄各半，灌胃，感染Hp(Hp的含量106/ml)0.1ml/只，隔天1次，同时每天给药，连续给药l6天后处死小鼠，取胃组织，测溃疡指数。

将果胶铋、甲硝唑和四环素三种药物进行剂量配比分析。用正交设计L934分析组方优化剂量，共设9组，其中三种药物分别用3水平即3个剂量，以药典临床推荐剂量折算成小鼠给药剂量为中剂量，低剂量为中剂量的1/2，高量为中剂量的2倍，果胶铋的每个剂量分别与甲硝唑和四环素的高、中、低剂量相组合[6]与水平如下：　表1　果胶B、甲硝唑、盐酸四环素正交实验

2.2　水浸拘束致小鼠胃溃疡实验[7]

BALBIC小鼠80只，♀♂各半，体重15-25g，随机均衡分为8组，即空白对照组(给予0.5% CMC);甲硝唑组;四环素组;果胶铋组;复方高剂量组;复方中剂量;复方低剂量;复方枸橼酸铋连续灌胃3天，每天1次，末次灌胃给药前禁食24小时，末次灌胃给药30 分钟后，将小鼠四肢捆绑固定于特制鼠板水面齐剑突，头上位直立浸于22±1℃的恒温水浴中，水浸10小时后取出处死，打开腹腔，结扎贲门和幽门，胃内注入1%甲醛2mL，取胃，置于1%甲醛中固定15 分钟，沿胃大弯剪开，冲洗胃内容物，平展于玻璃板上，解剖显微镜下读取溃疡指数计算溃疡指数和溃疡抑制率。方法如下：溃疡指数：1、 充血红斑2、 〈1mm的小溃疡1-5个　　3、 多于5个的小溃疡或一个明显溃疡4、 多个明显的溃疡5、 穿孔性溃疡溃疡抑制率(%)=对照组溃疡指数-给药组溃疡指数对照组溃疡指数×100%

2.3　幽门螺旋杆菌感染的沙土鼠实验[8]

取6-8周龄沙土鼠，禁食24小时，灌胃，感染Hp(Hp的含量106/ml)1ml/只，感染12小时后给予正常饮食，并于感染后第二天开始灌胃给药，连续给药2个月，处死动物，打开腹腔，结扎贲门和幽门，胃内注入1%甲醛2mL，取胃，置于1%甲醛中固定15 min，沿胃大弯剪开，冲洗胃内容物，平展于玻璃板上，解剖显微镜下读取溃疡指数计算溃疡指数和溃疡抑制率。溃疡指数：各组小鼠溃疡点数之和的均值溃疡抑制率(%)=对照组溃疡指数-给药组溃疡指数对照组溃疡指数×100%

3　实验结果

3.1　复方抗溃疡药组方正交实验(X±SD，n = 10)表2　果胶铋、甲硝唑、四环素正交实验

3.2　水浸拘束致小鼠胃溃疡实验结果

水浸拘束小鼠胃粘膜表面有凝血，擦去凝血，可见深褐色点状溃疡。研究结果(表1)表明：与对照组相比，GFF中剂量组、高剂量组的溃疡指数明显降低(P<0.01)，抑制率达到58.3%。阳性药JYS组的溃疡指数亦显著降低(P<0.01)。结果提示GFF能对抗水浸拘束所致小鼠胃粘膜损伤，并呈现剂量相关性。表3　复方抗溃疡药组对水浸拘束致小鼠胃溃疡的疗效

3.3　幽门螺旋杆菌感染的沙土鼠实验结果

表4　复方抗溃疡药组对幽门螺旋杆菌感染的沙土鼠胃溃疡疗效

4　讨论

外界环境的不良刺激如缺氧、过冷或过热、过度疲劳等以及人体自身过度的忧、思、恐、怒等情感刺激均可构成应急源，使机体处于应激状态。竞技是机体受到各种有害刺激后产生的一种非特异性紧张反应。长期在应激状态下生活可看导致机体生理机能下降。随着社会竞争的日愈激烈，人们时常处于应激状态，以至于体质虚弱、记忆力减退、免疫力下降、工作效率低下、引发亚健康状态。如果未引起足够重视而由症状持续下去，则会引发多种疾病，从病毒感染到消化性溃疡、心血管系统、神经系统、肿瘤等多种疾病。本文着重研究的就是复方抗溃疡药组对胃溃疡的治疗作用。

4.1　复方药组方的确定[9]

正交设计是采用一套规格化的正交表，使每次实验的因素和水平得到合理的安排。它具有以下特点：(1)设计严谨巧妙，分析每一因素时，其他因素的影响均自动抵消;(2)充分利用了所有实验信息;(3)以实验误差来判断各因素的显著性，符合正规的统计原则;(4)每组实验可进行5-10只动物的实验，可解决生物学实验波动大的问题，以及重复稳定性的问题;(5)可提供最佳组合，最佳计量，最佳条件，并可预测其实验结果。因此，本实验选择了正交设计来考察药物组合的最佳配比。通过正交设计，得出果胶铋、甲硝唑、四环素最佳剂量配比为100+180+180mg/kg。并通过方差分析发现果胶铋为最重要的因素，并进一步考察得出此组方抗水浸应激性作用优于单方。

4.2　复方药组方的优化

由于能够引起应激的因素很多，且复杂，能正确的选择一个合适的动物模型作为正交设计的实验模型尤为重要。水浸拘束致小鼠胃溃疡模型为神经紊乱型溃疡模型，发生机理比较复杂，一般认为是与植物神经紊乱导致迷走神经张力过高致使胃肌强力收缩，压迫肌肉血管，引起继发性粘膜血运障碍有关，溃疡发生在小鼠腺胃部。肉眼观察腺胃部有出血及条索状粘膜缺损，显微镜下观察可见胃壁缺损的程度仅达粘膜层、粘膜下层未到肌层故也将此种溃疡称为出血性粘膜糜烂。复方高剂量、复方中剂量组和复方枸橼酸铋能预防此种原因引起的溃疡。因此认为，它们有可能具有调节植物神经紊乱的作用，对人类应激性溃疡有预防作用。

5　实验结论

在复方抗溃疡组的正交设计实验中，分析得出果胶铋、甲硝唑、四环素最佳剂量配比为100+180+180mg/kg复方高剂量、复方中剂量、复方枸橼酸铋对实验动物胃溃疡可能有治疗作用。等效性比较结果表明GEF中剂量和JYS组疗效相同。

【参考文献】

[1]　金珠.幽门螺旋杆菌在胃内的分布情况的探讨[J].中华消化内镜杂志，1998,15(3)：133-155.

[2]　金琳.幽门螺旋杆菌的研究现状[J].医学综述，1995,1(6)：24.

[3]　王本苑.消化性溃疡研究现状[J].新消化病学杂志，1996,4(3)：123-124.

[4]　于皆平，陈建平.幽门螺旋杆菌的治疗[J].中级医刊，1995,30(2)：67.

[5]　徐俊良.洛赛克加氨苄青霉素治疗消化性溃疡伴幽门螺旋杆菌感染[J].南通医学院学报，1995,15(2)：2004.

[6]　金丕焕.医用统计方法[M].上海：上海医科大学出版社，1993：85-99.

[7]　Takagik，Okabes.The effects of drugs on the production and recovery processes of the ulcer stress[J].J Pharmacol,1968,18：9-18.

[8]　迟晶，傅宝玉，九岛亮治，等.沙土鼠幽门螺旋杆菌感染胃炎胃溃疡动物模型的建立[J].世界华人消化杂志，1999,7：557-560.

[9]　吴翠珍.正交设计在中药方剂研究中的重要意义[J].山东中医杂志，1999,18(9)：32.