高效液相色谱法同时测定三七伤药胶囊中4种成分

三七伤药胶囊收载于《国家药品标准新药转正标准第六十一册》,是由三七、草乌(蒸)、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木、赤芍等8味中药经提取加工制成的中药复方制剂,具有舒筋活血、散瘀镇痛作用[1],用于急慢性挫伤、扭伤、关节痛、神经痛、跌打损伤等。目前9同时测定三七伤药胶囊多个成分含量的文献笔者未见报道。笔者采用高效液相色谱法(HPLC)切换波长法同时测定三七中活性成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,骨碎补中活性成分柚皮苷、赤芍中活性成分芍药苷的含量[2-4],为该制剂的质量控制提供参考。

1仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪:SⅢMADZU⒛10AHT,Class-VP色谱软件系统。

1.2试药芍药苷(批号:110736-201136)、柚皮苷(批号:110722-201111)、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1,以上4种对照品均购于中国食品药品检定研究院;三七伤药胶囊(广西玉林制药集团有限公司,批号:310150,310151,3101,规格:0.25g),阴性样品自制;甲醇为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱:shim-packVP-0DSC1:(250mm×4.6mm,5um);流动相:乙腈(A)-水(B);进样量:10uL;流速1.0mL·min1;检测器:紫外。各主成分与相邻峰之间的分离度>1.5,分离度良好。色谱条件见表1。

2.2对照品溶液的制各精密称对照品适量(芍药苷[5]12.51mg、柚皮苷[6]10.O~s mg、人参皂苷Rg11O.∝mg、人参皂苷Rb110,⒃mg)置犭mL量瓶中,制成混合溶液,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得(配成浓度为药苷0.5CKl4mg·mL㈠、柚皮苷0硐2吧·lllL人参皂苷Rg10.娴16mg·lmL l、人参皂苷Rb10.0o94mg·lmL1的混合对照品溶液)。

2.3供试品溶液的制各取样品10粒内容物,精密称定,研细,精密称取细粉约1g,置具塞锥形瓶中,精密加人甲醇50mL,称定质量,充分振摇,超声提取娴min,补足减失的质量,放置室温后,取上清液,滤过,即得。

2.4阴性对照溶液的制各以相同处方比例,制得不含三七、骨碎补、赤芍的阴性样品,按供试品溶液的制各方法制成空白对照溶液。

2.5线性关系考察精密称取芍药苷12.53mg、柚皮苷10.12mg、人参皂Rg110.17mg、人参皂苷Rb1 10.“mg,置于10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取0.1,0.5,1.0,2.0,5.0,10.0mL置10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度。注人液相色谱仪分析,以峰面积对浓度做线性回归方程。得各成分回归方程,结果见表2。

2.6稳定性实验取同一供试品溶液,按上述色谱条件每隔4h进行测定,共计进样6次,测定其稳定性。芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为1.9%,1.8%,1.7%,1.8%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定[6]。

2.7精密度实验精密吸取同一混合对照品溶液,连续进样6次,测定其峰面积芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷RbI,RSD分别为0.51%,0.55%,0.81%,0.72%(而=6),结果表明本法精密度良好[7]。2.8重复性实验取同一批号的样品6份,按“供试品溶液的制各”方法制各溶液并依法测定,结果芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的RSD分别为1.8%,置.1%,1.9%,1.6%(n=6),结果表明重复性良好。

2.9回收率实验精密称取已知含量的三七伤药胶囊样品适量,精密加人对照品适量,按“供试品溶液的制备”方法处理,计算各成分的回收率。结果表明,本法具有良好的加样回收率[8]。结果芍药苷平均回收率98.38%,RSD1.0%;柚皮苷平均回收率叨.30%,RSD1.0%;人参皂苷Rg1平均回收率,RSD 1.1%;人参皂苷Rb1平均回收率叨.13%,RSD0.6%,见表3。

2.10样品含量测定按供试品溶液项下制各方法和色谱条件对3批样品中芍药苷、柚皮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进行分析,计算含量[9],结果见表4。

3讨论

3.1流动相的选择流动相应用乙腈-水,流动相用甲醇-水时人参皂苷类成分有末端吸收。导致明显的基线噪音,故选用乙腈为流动相的有机相。流动相的比例定为乙腈-水(17∶83)芍药苷的分离度才能够达到要求。

3.2检测波长的选择根据4种待测成分及其在色谱柱上分离顺序的先后,结合流动相的梯度配比,最终确定检测波长,使主成分干扰小、能够达到良好分离。

参考文献：

[1]国家药品标准新药转正标准[S].2004.33.

[2]郭锦明,戚爱棣,李庆云. HPLC-VWD法同时测定丹参及三七混合物中8种有效成分的含量[J].齐鲁药事,2010,(01):11-14.

[3]王冰,张振秋,孙艳涛. HPLC切换波长法同时测定升麻中5种成分的含量[J].药物分析杂志,2011,(02):391-394.

[4]韦志疆. 高效液相色谱法测定三七伤药胶囊中芍药苷含量[J].中国药业,2012,(10):33-34.

[5]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.451.

[6]杨孝容,向清祥,熊俊如. HPLC测定柏子养心丸中五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量[J].药物分析杂志,2006,(11):1558-1561.

[7]连传宝. HPLC切换波长法同时测定参芪五味子片中五味子酯甲和五味子甲素的含量[J].齐鲁药事,2011,(08):458-460.

[8]金慧臻,狄留庆,汪晶. HPLC法同时测定凉血通瘀颗粒中7种主要活性成分[J].中草药,2012,(06):1105-1107.

[9]韩晓萍,李德坤,周大铮. HPLC同时测定五味子提取物中的4种类三萜内酯类物质的含量[J].中国中药杂志,2011,(16):2226-2229.