正交试验法优选防风感冒颗粒制备工艺

防风感冒颗粒为本院院内制剂,由防风、黄芩、半夏等中药组成,具有解表清热、温胃止呕之功效。为了筛选其最佳提取工艺条件,保证临床疗效稳定,本研究采用正交试验设计,以干膏得率和黄芩苷含量为评价指标,分别考察了水煎煮提取时加水倍数、提取时间、提取次数对考察指标的影响,对水煎煮提取工艺进行优化,以及醇沉浓度、浓缩倍数对考察指标的影响,对醇沉工艺进行优化,以期为防风感冒颗粒的生产工艺提供试验依据。
1 仪器与试药
美国Waters 1525高效液相色谱仪,Waters 2487紫外检测器,Breze色谱工作站,超声波清洗器(KQ2500DE),电子天平(Sartorius R-200D德国),电热套(HM500型,北京科伟仪器公司),HS数显恒温水浴锅。防风、半夏、黄芩等中药饮片购自兰州安泰堂中药饮片公司,经甘肃省药品检定所宋平顺主任药师检定,符合2010年版《中华人民共和国药典》各药材项下规定的标准;黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号1107152200212;甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 黄芩苷的含量测定
2.1.1 色谱条件
色谱柱：Symmetry C18柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液(54∶46);流速：1.0 mL/min;柱温：室温;检测波长：276 nm[3]。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中,制成每毫升含黄芩苷0.150 mg的对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备
将9个样品,分别精密称取5.0 g,置25 mL容量瓶中,加甲醇适量,超声处理45 min并定容至刻度,过滤,弃去初滤液,取续滤液,作为供试品溶液。
2.1.4 测定结果
分别吸取对照品溶液及供试品溶液各工艺下的溶液10 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以外标法计算样品中黄芩苷的含量。色谱图见图1。
2.2 干浸膏得率的测定
以原处方比例称取药材,黄芩在其他药物煮沸后加入,分别进行水煎煮、醇沉、回收乙醇后药液浓缩成浸膏,移置经110 ℃干燥3 h至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于105 ℃干燥3 h,取出,移置干燥器中,冷却至室温,迅速精密称定重量。计算干浸膏得率[干浸膏(g)/原药材(g)×100%]。A B C注：A.黄芩苷;B.样品;C.阴性对照图1 防风感冒颗粒高效液相色谱图
2.3 水煎煮工艺正交试验考察
2.3.1 水煎煮工艺正交试验设计
根据药材提取过程中的影响因素,以及该组方特点,选定加水量、提取次数、提取时间作为考察因素,以干膏得率及黄芩苷含量作为评价指标,正交试验因素与水平见表1。按L9(34)正交设计表安排试验,优选最适宜的水煎煮提取工艺条件。应用综合加权评分法对结果进行分析,黄芩苷含量和干膏得率的权重系数分别为0.8和0.2,即y1=干膏得率/(干膏最高得率×0.2×10),y2=黄芩苷含量/(黄芩苷最高含量×0.8×10),综合评分=y1+y2。试验结果见表2,方差分析见表3。　　表1 水煎煮工艺正交试验因素水平表表2 水煎煮工艺正交试验结果表3 水煎煮工艺方差分析
2.3.2 水煎煮提取正交试验结果分析
由方差分析可得,以黄芩苷含量和干膏得率为指标,提取次数对其有显著影响,加水倍数和提取时间对观察指标的影响极微。直观分析表明,对黄芩苷含量和干膏得率影响因素程度为B>C>A,即影响最大的是提取次数,其次是加水倍数和提取时间。综合分析提取条件为A1B3C2,即加8倍量水,提取3次,每次2 h。
2.3.3 验证试验
按照最佳工艺条件进行3批验证试验,以黄芩苷的含量和干膏得率为评价指标,结果见表4。可知,该工艺条件基本稳定,可行,重复性强。表4 水煎煮工艺验证试验结果
2.4 醇沉工艺正交试验研究
2.4.1 醇沉工艺正交试验设计
结合防风感冒颗粒的制备工艺,从水煎煮得到的干浸膏量分析,选择将水煎液进行醇沉处理,以达到“去粗存精”的目的。以浓缩液比重、醇沉浓度为考察因素,干膏得率及黄芩苷的含量为评价指标,对醇沉工艺进行优化,按L9(34)正交设计表安排试验(见表5),优选最适宜的醇沉工艺。采用综合加权评分法对结果进行分析,黄芩苷含量和干膏得率的权重系数分别为0.6和0.4,试验结果见表6。表5 醇沉工艺正交试验因素水平表表6 醇沉工艺正交试验结果
2.4.2 醇沉工艺正交试验结果分析
直观分析表明,醇沉时对黄芩苷含量和干膏得率影响程度为A>B,即浓缩液比重>醇沉浓度。最佳醇沉条件为A2B2,即浓缩液比重为1.05 g/mL,醇沉浓度为60%。
3 讨论
防风感冒颗粒制剂含有多味中药,成分较为复杂,故选择干膏得率作为考察指标之一。虽然防风为该制剂的君药,但防风主要含挥发性成分,不好定量,而处方中黄芩为第一臣药,具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎功效,用于湿温、暑温之胸闷呕恶、湿热痞满、泻痢、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐衄、痈肿疮毒、胎动不安。其含多种黄酮类化合物,主要为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷等。现代药理学研究表明,黄芩苷有抗菌、抗病毒、抗炎、解热等作用。与防风感冒颗粒解表清热、温胃止呕相近,故选择第一臣药黄芩中所含的黄芩苷作为另一考察指标。
本试验采用正交设计的试验方法,应用综合加权平均法对试验数据进行分析。在提取工艺筛选试验中为了达到有效成分最大量溶出,选择0.8和0.2为权重系数。在醇沉工艺筛选试验中,为了达到纯化效果,同时保证药物有效组分最大量保留,将权重系数定为0.6和0.4,筛选出最优的提取纯化工艺,同时也保证了有效成分的含量,进而促进了药效的发挥。验证试验数据结果显示,此工艺合理、稳定可行
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