牛耳枫的生药学研究

　　牛耳枫为虎皮楠科植物牛耳枫Daphuiphyllum calycinumBenth.的干燥带叶茎枝，主要分布在江西、福建、广西、广东、云南、海南等地，为黎族、壮族常用药材。夏、秋两季可采收，具有祛风止痛、解毒消肿之功效，主治风湿骨痛、疮疡肿毒、跌打骨折、毒蛇咬伤等，其主要化学成分为生物碱类及黄酮类化合物，现代药理学研究其生物碱对HepG-2细胞具抑制作用。虎皮楠科仅有一属，即虎皮楠属，本属在我国分布有10种，除牛耳枫外，本属的交让木DaphniphyllummacropodumMiq虎皮楠Daphniphyllumoldhami Rosenth.亦作为传统中药，用来治疗哮喘、咳嗽、风湿、炎症、发热和毒蛇咬伤。
　　杨卫丽等对牛耳枫药材进行了生药学研究，但此文未对原植物形态，叶表面及解离组织的显微特征进行研究;加之牛耳枫为少常用品种，缺少系统的鉴别依据;所以本文主要对牛耳枫的植物形态、药材性状、显微特征(包括叶横切面、叶表面、细茎及粗茎横切面、解离组织)、薄层色谱等方面进行全面研究，为其药材标准的修订及提高提供依据。
　　在各种新技术快速发展的今天，显微及薄层色谱技术仍凭借其简便、快捷、经济、环保等特点，在中药材鉴定、研究等方面有诸多应用，为中药的发展做出贡献;如周谧等使用显微技术对黄花列当的生药特征进行鉴定.薛金龙等使用显微技术对羊开口进行生药学研究.为中药材质量标准的制定提供依据张继等。使用显微及薄层色谱技术对水红花子及其伪品商陆种子进行比较研究，为中药材伪品的鉴别提洪快速有效的手段。
　　1实验材料
　　牛耳枫原植物采集于广西省桂林市，经《中国植物志检索并鉴定为虎皮楠科植物牛耳枫DaphniphvllurncalyciuumBenth.的干燥带叶茎枝“二药材及饮片样品由广西圣康新药特药销售有限责任公司甲药饮片分公司提供，经与原植物比较并鉴定为同一植物种。原植物、药材及饮片标本现均存于中国食品药品检定研究院中药所。水合氯醛、甘油试液均按中国药典2010年版一部附录XVB配制。
　　薄层板:采用硅胶G板(青岛海洋化工有限公司，100mmx100mm),1050C活化1h}试剂:甲醇(扎仁号:LOTN0.106535、乙醇(批号:LOTN0.105743)为色谱纯，FisherScientific公司;氯仿(批号:LOTN0.107749)、乙酸乙醋(批号:LOTN0.104412)、三氯甲烷(批号:I,OTN0.106485)为分析纯，FisherScientific公司;水(批号:20120220)为屈臣氏纯净水;其他试剂均为分析纯，北京化学试有限公司。
　　2实验方法与结果
　　2.1原植物形态、药材性状、显微鉴别按照中国药典2010年版一部附录}C显微鉴别法制作药材叶横切面片、叶表面片、茎横切面片及解离组织片。采用OLYMPUSBX51显微数码成像系统观察并拍摄药材叶横切面、叶表面、茎横切面及解离组织装片的显微特征，并用OLYMPUSSZX12体视显微镜数码成像系统观察并拍摄原植物及药材性状特征。
　　2.1原植物形态灌木，高1.5}4m。小枝灰褐色，直径3一7mm，具稀疏皮孔。单叶互生，叶柄长3一10cm，叶片宽椭圆形至倒卵形，长10一15cm,宽3.5一9cm，先端钝或急尖，基部宽楔形，全缘，边缘背卷;叶面具光泽，叶背多少被白粉，具白色细小乳头状突起;侧脉8一11对，在叶面清晰，叶背突起。果实卵圆形，较小，长7}9mm，被自粉，具小疵状突起，先端具宿存两裂柱头，基部具宿尊(图1)。
　　2.2药材性状茎枝呈圆柱形，直径0.3一1.4cm;表面灰绿色或浅灰棕色，具稀疏皮孔，体轻质硬，较难折断，断面灰自色或浅棕色，有疏松髓部或髓部中空叶片基部宽楔形，全缘;上表面草绿色至浅灰棕色，下表面浅绿色至灰棕色，多少被白粉，并具白色细小乳头状突起;叶脉下表面突起，侧脉明显。叶柄长3-5cm，革质果实卵圆形，较小，长7}9mm，被白粉，具小疵状突起，并有不规则的皱纹，先端具宿存两裂柱头，基部具宿警。气微，味微苦(图2)。
　　2.3显微鉴别
　　2.3.1叶横切面上表皮细胞类方形或长方形，外被角质层;下表皮细胞略小，部分外壁呈乳头状突起二栅栏细胞1列，海绵组织排列疏松。主脉于上表面稍隆起，下表面明显凸出，主脉维管束类半圆形，外韧型，木质部由木化的导管、木纤维和木射线组成;髓部位于主脉维管束中心，由少量薄壁细胞组成或中空;维管束鞘纤维呈断续的环状排列，纤维直径10-25mm，微木化。主脉上、下表皮内侧有一至数列厚角细胞。薄壁细胞常含草酸钙簇晶(图3)02.3.2叶表面上表皮细胞垂周壁波状弯曲或较平直，直径28一80mm，部分细胞含草酸钙簇晶，含晶细胞直径12一24mm，常并列或成群分布。下表皮细胞垂周壁较平直，乳头状突起呈小圆圈状;气孔平轴式;草酸钙簇晶较多，常并列或成群分布(图4)。
　　2.3.3细茎横切面(直径6mm)表皮细胞1列，外被厚角质层。皮层由数列至十余列薄壁细胞组成，薄壁细胞含众多草酸钙簇晶。中柱鞘纤维束由4一25个纤维组成，常排列成不连续的环，中柱鞘纤维胞腔小，微木化，直径10-30N,mo韧皮部约和皮层同宽，韧皮射线由1-2列细胞组成常见草酸钙簇晶。形成层不明显。木质部宽广，由导管、木纤维、木射线及木薄壁细胞组成，均木化;导管类方形或多角形，直径20一40mm，多单个或2一3个成群;木纤维胞腔较大，直径10-20mm，木射线为1一2列细胞组成，少数术射线细胞含有黄色块状内含物或草酸钙簇晶。髓部薄壁细胞类圆形，微木化，可见纹孔。中央多成空隙(图5)。
　　2.3.4粗茎横切面(直径13mm)木栓层为数列扁长的细胞，细胞内含黄褐色至褐色块状物。韧皮部可见单个或2一8个成群的石细胞，石细胞壁厚，木化，可见明显的层纹和纹孔，直径20一140mm图6.
　　2.3.5茎解离组织木栓细胞表面观类方形或不规则形，直径20一38N.,m，内含黄色至黄褐色块状物石细胞类圆形、长多角形，有的一端延长渐尖，有的胞腔内含红棕色内含物，直径20一200},m。中柱鞘纤维狭长，末端尖锐或钝形，长1100一2000N.,m，直径15一25}.,m，少见单纹孔。木薄壁细胞长方形，直径20一40N.,m，长48一100Nm.纸范'-稍增厚，可见单纹孔。草酸钙簇晶常见.直怪10}25N.,m。导管多为梯纹导管，直径15}40}n-长50-220N.,m。纤维管胞狭长，末端尖锐.长-195一1700}a,m，直径10一18N.,m，常可见具缘纹孔整子译n排列(图7)。
　　2.4薄层色谱鉴别方法的改进《广东省中药材标准(第一册)》“牛耳枫”薄层鉴别方法如下:取本品粗粉59，加1%盐酸乙醇溶液50mL，超声处理30min,滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水l0mL使溶解，滤过，滤液用氨试液调pH至10一11，用只氯甲烷10mL振摇提取，分取三氯甲烷层，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液;另取牛耳枫对照药材59，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录ZIB)试验，吸取上述2种溶液各3},L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一乙酸乙醋一甲醇一水(30:40:20:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化秘钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图8一A。
　　该标准方法中，薄层色谱斑点不明显，不易进行判断。鉴于此种情况，本文参照有关标准2止，对牛耳枫药材的薄层鉴别项进行了改进方法如下:取本品0.5g，加人60%乙醇溶液30mL，加热回流30min,蒸去乙醇，加水20mL，稀硫酸0.5mL，加热回流1h，加乙酸乙醋30mL提取，分取乙酸乙醋提取液，置水浴上浓缩至约1mL，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录}TB)试验，吸取上述2种溶液各3},L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(水饱和)一甲酸乙醋一甲酸(5:4:I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液。置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图8.
　　3讨论
　　3.1牛耳枫的现行标准中，性状项的专属性不强，很难和其同属植物区分;建议在性状项中增加“叶下表面多少被白粉，并具白色细小乳头状突起;果卵圆形，长7一9mm，具小疵状突起，先端具宿存两裂柱头，基部具宿尊”。《广西壮族自治区壮药质量标准》牛耳枫鉴别项中茎横切面特征不准确，且叶横切面的重要特征未描述;建议鉴别项茎横切面特征“中柱鞘部位具纤维束及石细胞，常横排成不连续的环”改为“中柱鞘部位具纤维束排列成不连续的环状，且粗茎的韧皮部中可见石细胞单个散在或2一5个成群”，叶横切面特征“下表皮细胞较小”改为“下表皮细胞较小，部分外壁呈乳头状突起”。
　　3.2本文全面研究了牛耳枫的原植物和药材性状，以及组织结构和解离组织的显微特征。牛耳枫茎的显微研究展示了随植物的次生生长，表皮层被木栓层替代的过程，并且粗茎的韧皮部中出现了具支持作用的石细胞。研究表明，在中药材检验中应注意样品的取材部位。
　　3.3通过对茎解离组织的研究，展示了纤维管胞较中柱鞘纤维细胞壁薄，且细胞壁上常可见具缘纹孔;根据木材解剖特征所揭示的演化趋势—管胞演化到纤维管胞、木纤维，直至韧型纤维「121，说明牛耳枫茎的显微特征较原始。为牛耳枫及虎皮楠科的系统位置研究提供参考资料。
　　3.4通过对牛耳枫生药学的系统研究，本种的鉴别要点如下:在药材性状上，果实最具鉴别意义，具明显的宿存花粤，且果实表面被白粉及细小疵状突起;在药材显微特征方面，叶上、下表皮均具含晶细胞，且叶下表面多见乳头状突起，叶主脉维管束与茎相似，属于多叶迹维管束，为外韧型。
　　3.5改进后的薄层方法，显色灵敏，薄层斑点清晰，可作为牛耳枫的薄层鉴别项。
　　致谢:样品及标本采集得到了重庆赛诺生物药业股份有限公司的大力支持。在此谨表谢忱.
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