阿片类化合物中氮氧化物杂质的定位鉴别

　　阿片类化合物分为阿片受体激动剂和阿片受体拮抗剂两类。其中阿片受体激动剂主要用于治疗各种原因引起的疼痛，常见药物包括可待因、轻考酮等;而阿片受体拮抗剂则用于治疗阿片受体激动剂引起的呼吸抑制、术后药物的残余作用及副反应等，常见药物包括纳洛酮、纳曲酮等。
　　阿片类化合物的杂质主要分为过程杂质和降解杂质，而氮氧化物是该类化合物主要的一种降解杂质。目前国外药典和进口药品注册标准越来越开始关注氮氧化物这一杂质「2-3]，并研制出相应的氮氧化物杂质对照品以便对其进行限度检查。但国内由于缺少该类杂质的对照品，因此在中国药典2010年版中各种阿片类药物并未对氮氧化物进行限度检查。本文以阿片类化合物中最常见的磷酸可待因、盐酸纳洛酮、盐酸氢可酮、蒂巴因和盐酸经考酮5个化合物为例，拟统一采用溶剂溶解，氨水碱化，双氧水加热破坏的方法使其降解，得到其氮氧化物的定位鉴别溶液，以满足阿片类化合物中氮氧化物限度检查的需要，解决国内缺少该类杂质对照品的问题。
　　1仪器与试药
　　Agilent1290高效液相色谱仪，Agilent6530Q-TOF质谱仪。经考酮氮氧化物对照品(NappPharmaceuticalsLimited，批号STND1116),盐酸经考酮对照品(NappPharmaceuticalsLimited，批号STAB864)，盐酸纳洛酮对照品(中国食品药品检定研究院，批号171239-201105),磷酸可待因对照品(中国食品药品检定研究院，批号171203一201005)，蒂巴因对照品(中国食品药品检定研究院，批号171216-200403)，酒石酸氢可酮(中国食品药品检定研究院，批号171261一200601)，乙睛为色谱纯，双氧水浓度为30%，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。
　　2方法与结果
　　2.1液相色谱条件采用ZOBAXEclipsePlusC,8(50mmx2.1mm,l.8p,m)色谱柱。水为流动相A，乙睛为流动相B，梯度洗脱(0一1min时，流动相B为5%;1一5min时，B逐渐升至950}c)。进样体积1p,L，柱温40℃，流速0.4mL·min。
　　2.2质谱条件采用电喷雾离子源ESI(+)，离子源温度325℃，离子源电压5.0kV，离子源气流速6L·min，喷雾电压3.0kV,雾化气压力0.3MPa,鞘气温度400℃，鞘气流量:12.L·min。
　　2.3鉴别溶液的制备将10mg磷酸可待因、盐酸纳洛酮、盐酸轻考酮和酒石酸氢可酮分别溶解在5mI水中(将蒂巴因溶解在5mL甲醇中)，加人1滴氨水，加人0.1mL30%过氧化氢破坏，置70℃水浴中加热2h，冷却至室温，加人二氧化锰约1g,过滤，得到相应的氮氧化物鉴别溶液。
　　2.4实验结果由于磷酸可待因和盐酸纳洛酮等均无相应的氮氧化物杂质对照品，因此采用高分辨的LC一MS/MS对破坏得到的鉴别溶液进行了结构确证各氮氧化物鉴别溶液的总离子流色谱图见图1，各[M+H]+离子的二级质谱的碎片离子信息见图2，结果表明各离子的测定值与计算值的偏差均小于0.00021%(表1)，通过破坏得到了相应的氮氧化物.
　　3讨论
　　3.1实验中采用四因素三水平的正交设计，考察了不同体积的氨水(0.0,0.1,0.2mL)、不同体积的双氧水(0.1,0.2,0.3mL)、不同的加热时间(1,2,3h)和温度(60,70,80℃)对制备鉴别溶液的影响，最终确定了破坏条件，见“2.3”项下。
　　3.2可待因氮氧化物鉴别溶液的HPLC和IJPLC-MS/MS结果均显示破坏结果为双峰，且两峰的高分辨质量数据一致，推测二者可能为非对映异构体，见图4.
　　4结语
　　由于阿片类药物均具有类似的叔胺结构，均易氧化生成相应的氮氧化物杂质;因此采用过氧化氢加热破坏的方法得到氮氧化物杂质鉴别溶液的方法，不失为解决目前国内阿片类药物缺少氮氧化物杂质对照品和有效提高该类药物质量标准的方法之一。
　　参考文献
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