甘草与乌头液对小鼠乌头毒量药动学参数的影响

作者                    作者单位

黄洁          湖南中医药大学,湖南,长沙,41007

谭牛仔        湖南中医药大学,湖南,长沙,41007

贺龙刚        湖南中医药大学,湖南,长沙,41007

田育望        湖南中医药大学,湖南,长沙,41007

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 乌头﹑甘草由湖南省药材公司购入，经湖南中医药大学中药化学教研室杜方麓教授鉴定无误。将药物煎煮，浓缩，过滤，制得乌头煎液(下称单煎液)、甘草与乌头合煎液(原药材质量比为1∶1，下称合煎液)，均相当于每毫升药液含生药乌头1 g(本文中所有浓度，均以每毫升药液含生药乌头量计算)。灭菌，4 ℃冰箱保存备用。

1.1.2 动物 昆明种小鼠170只，体质量(20±2)g，雌雄各半，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号为湘医动字第20-002号。其中40只用于单煎液LD50的测定，50只用于合煎液LD50的测定，40只用于单煎液毒量药动学参数的估算，40只用于合煎液毒量药动学参数的估算。按性别、体质量进行随机区组设计。

1.2 方法

1.2.1 单煎液与合煎液的LD50比较[1，2] 将几个不同剂量药液(单煎液与合煎液分别做几个剂量)注入小鼠腹腔，观察48 h存亡情况。以死亡率概率单位为y，与对数剂量进行统计分析，计算回归方程。分别得出单煎液及合煎液小鼠腹腔注射的LD50。

1.2.2 单煎液与合煎液毒量药动学参数的比较(动物急性死亡率法[3-5])以死亡率较低的同一剂量注入2次(一般主张两次给药剂量均用1/2 LD95)，间隔时间分别为0.25、0.5、1.0、2.0 h。由两次用药后的死亡率查出其概率单位，再由对数剂量——死亡概率回归方程求出各组概率单位的相当剂量，以此量减去第2次注入量，即得第1次用药后的体存量。而后取对数体存量，以间隔时间——对数体存量作图，由图判断动力学模型。分别求得单煎液及合煎液药动学参数，并分析体内过程。

1.2.3 给药方法 小鼠禁食12 h，按0.2 mL/10 g体质量的剂量给药。

2 结果

2.1 单煎液与合煎液的LD50比较

2.1.1 单煎液小鼠腹腔注射法LD50的测定和标准曲线的回归分析 通过反复预试，确定剂量范围，以死亡率概率单位为y，与对数剂量进行统计分析，得出回归方程：

y=12.063 LgD-3.706 2(r=0.996 1，P<0.01)

依此方程，单煎液对小鼠的LD50为5.27 g/kg，LD50的95%可信限为4.84 g/kg～5.73 g/kg。结果见表1。

2.1.2 合煎液小鼠腹腔注射法LD50的测定和标准曲线的回归分析，得出回归方程：

y=16.759 LgD-11.278(r=0.994 8，P<0.01)

依此方程，合煎液对小鼠的LD50为9.36 g/kg，LD50的95%可信限为8.84 g/kg～9.91 g/kg。结果见表2。

2.1.3 单煎液与合煎液LD50比较 统计表明，合煎液小鼠腹腔注射法LD50与单煎液相比，有显著差异，即甘草与乌头合煎能显著提高乌头小鼠腹腔注射LD50。

2.2 单煎液与合煎液毒量药动学参数的比较(动物急性死亡率法)

2.2.1 单煎液毒量药动学参数的估算 经反复摸索，确定给药剂量为3.7 g/kg，以间隔时间——对数体存量作图1，由图可知，4点呈直线关系，故属一级动力学一室模型，回归方程如下：

Y=0.530 7-0.254 1X(r=-0.997 8，P<0.01)

按一室药动力学公式求得参数：K=0.585 2 h，t1/2=1.18 h，最大体存量C0=3.4 g/kg，表观分布容积Vd=1.088 L/kg，

AUC=5.81 mg/(kg·h)，CL=0.637 kg/h。结果见表3。

2.2.2 合煎液毒量药动学参数的估算 经反复摸索，确定给药剂量为7.3 g/kg，以间隔时间一对数体存量作图2，由图可知，4点呈直线关系，故属一级动力学一室模型，回归方程如下：

Y=0.662 4-0.326 8X(r=-0.998 3，P<0.01)

按一室药动力学公式求得参数：K=0.752 6 h，t1/2=0.92 h，最大体存量C0=4.6 g/kg，表观分布容积Vd=1.587 L/kg，AUC=6.11 mg/(kg·h)，CL=1.194 kg/h。结果见表4、图2。

2.2.3 单煎液与合煎液毒量药动学参数的比较 与单煎液药动学参数比较，合煎液在小鼠体内的消除速率常数增大，半衰期缩短，最大体存量增加，表现分布容积增大，曲线下面积略增大，清除率明显提高。

3 讨论

本文采用动物急性死亡率法，根据药物量效关系研究其在体内动态变化，体现了复方配伍的整体性，符合中医基本理论。

单煎液小鼠腹腔注射的LD50为5.27 g/kg，表明乌头毒性较大，对数剂量-死亡率概率单位直线回归方程斜率较大，小鼠对本品比较敏感。单煎液与合煎液LD50比较提示：甘草与乌头合煎能显著提高乌头小鼠腹腔注射LD50。

急性死亡率法动力学研究表明，单煎液及合煎液在小鼠体内均呈一级动力学消除，具有一室开放模型特征。药动学参数的比较提示：与乌头煎液相比，甘草与乌头合煎液在体内分布可能更广泛;血液中药物的相对累积量可能增加;单位时间内消除药物的比例增大，药物从血中清除的速率加快，消除半衰期缩短，可能消除加快。

本研究其基本实验数据为药物体存量——时间，所绘图形不是血药浓度——时间曲线，而是体存量——时间曲线。由于毒性属于生物反应，变异性较大，故采用这类方法得到的药动学参数只是一种大体估测。

【参考文献】

[1] 韩国柱.中草药药代动力学[M].北京：中国医药科技出版社，1999：227-234.

[2] 刘昌孝.实用药物动力学[M].北京：中国医药科技出版社，2003：290-295.

[3] 赫梅生，詹丽芬，郭景阳，等.用动物急性死亡率法估计药物体存量与表观半衰期[J].中国药理学报，1985，6(3)：213-216.

[4] 詹丽芬，张玉芝，赫梅生，等.用小鼠急性死亡率法测定山莨菪碱的表观药动学参数[J].中国药理学与毒理学杂志，1987，1(3)：224-227.

[5] 贺石林，李安国，彭延古，等.地龙提取液抗凝效量与毒量药动力学参数的估测[J].中国药学杂志，l992，27(6)：336-339.