冰片对灯盏花素鼻腔给药在大鼠体内药动学的影响

作者                             作者单位

石森林              浙江中医药大学药学院 杭州 310053

吴瑾瑾              浙江中医药大学药学院 杭州 310053

葛卫红              浙江中医药大学药学院 杭州 310053

张晓东              浙江中医药大学药学院 杭州 310053

徐莲英              上海中医药大学中药学院

开窍中药具有通关开窍、启闭回苏的作用，冰片(bomeol)为芳香开窍类中药，《本草衍义》指出，作为佐使药“独行则势弱，佐使则有功”，并有“率领群药”的作用。《本草经疏》称冰片“性善走窍，无往不达”，许多中成药如苏合香丸、安宫牛黄丸、冰硼散等，都有冰片的配伍应用。现代研究表明，冰片可提高药物的生物利用度而提高疗效[12]。本文从药动学的角度，观察冰片对灯盏花素鼻腔给药在大鼠体内的药动学过程的影响，以期为灯盏花素鼻腔给药制剂的处方设计提供依据。

1 材料与仪器

1.1 试药 灯盏乙素对照品，中国药品生物制品检验所，批号：110842200403;灯盏花素，购于云南玉溪万方天然药物有限公司，批号：030702;Na125I，中国科学院上海原子核研究所提供;NaCl、EDTA、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4等均为分析纯;肝素钠，购于浙江英特医药股份有限公司;冰片，广州市黄埔化工厂生产，批号：021101。

1.2 仪器 SN682放射免疫γ计数器(中国科学院上海原子核研究所);岛津LC10AT VP高效液相色谱系统，SPD10A VP紫外检测仪，色谱数据处理工作站，Echrom 98;PHS3TC 精密酸度计，上海天达仪器有限公司;78HW-3 恒温磁力搅拌器，杭州仪表电机有限公司;501A超级数显恒温水浴，上海浦东荣丰科学仪器有限公司;DDL5 冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂;CQ250型超声波清洗器(上海超声波仪器厂);AB204N电子天平(梅特勒托利多)。

1.3 实验动物 SD大鼠，雄性，体重230～250g，上海复旦大学实验部。

2 方法与结果

2.1 125I灯盏乙素的制备与测定

2.1.1 125I灯盏乙素的制备 取涂有Iodogen(5 ug)的反应小试管，依次加入灯盏乙素溶液50uL(1.0mg/ml)，NaI溶液2～4μl(18GBq/mL)，室温条件下搅拌反应5min后。加入0.5mL 0.01mol/L pH7.4的PBS缓冲液终止反应。反应液立即采用C18反向液相色谱柱分离纯化，收集125I灯盏乙素峰，N2吹干。

2.1.2 纯度测定 标记物经Sephadox LH20柱层析检测，放射性化学纯度>95%，可用于动物试验。

2.1.3 样品测定 用γ计数器直接测定样品的放射性计数(cpm)，然后换算成样品中相应的灯盏花素含量。

2.2 灯盏花素不同给药途径给药的药动学比较

2.2.1 给药方法 (1)鼻腔给药：取SD大鼠，体重250～350g，腹腔注射20%乌拉坦麻醉(0.5ml/100g)，仰卧固定，打开颈部，暴露气管和食管，作气管插管以维持大鼠正常呼吸。分离食管，用微量注射器前接一柔软PE管插入大鼠鼻孔约5 mm,缓慢注入药液，每鼻孔10μl，给药后立即结扎食管，防止药液流失。(2)尾静脉给药：大鼠尾巴，在温水中浸泡适当时间，以75%乙醇擦洗，左手食指按住尾静脉近心端，待静脉充盈后，1ml注射器配4号针头，以30角进行静脉穿刺，推注药液无阻力感，表明针头在血管中，继续缓慢推完药液，每只20μl，给药完毕后用干棉球压迫止血。

2.2.2 动物分组与实验 取雄性SD大鼠9只，试验前3天，在饮水中加入1%的碘化钾，饱和实验动物甲状腺，随机分为尾静脉注射、经鼻给药、经鼻给药加冰片组(含1%冰片)3个试验组，每组动物3只。经鼻给药(加1%冰片)组，每只大鼠每鼻孔给予50μg 125I灯盏花素，静脉组给药量为100μg 125I灯盏花素。给药后，分别于1、5、10、15、30、45、60、75、90、120、150、180、210、270、330 min颈动脉采血、离心，取血浆50μl。γ计数器测定放射活度，计算药物浓度。

2.2.3 药时过程 (1)125I灯盏花素静脉给药(0.4mg/kg)，药时过程结果见图1。(2)125I灯盏花素鼻腔给药(0.4mg/kg)，药时过程结果见图2。(3)125I灯盏花素经鼻给药加冰片组(0.4mg/kg)，药时过程结果见图3。

图1 注射给药药时曲线

图2 经鼻给药药时曲线图图3 经鼻给药加冰片药时曲线图2.2.4 药动学参数 将以上数据用中国药理学会3P87实用药代计算程序进行处理，根据药代动力学房室模型的判断方法，确定125I灯盏花素在体内的过程符合三室模型，计算的药动学参数见表1。表1 不同给药途径药动学参数比较鼻腔给药绝对生物利用度53.70%，而鼻腔给药加冰片组为52.86%，提示冰片延长了灯盏花素鼻腔给药在大鼠血浆中灯盏乙素的达峰时间，但对绝对生物利用度基无影响。

3 讨论

药物体内研究的关键是体内药物的分析测试，目前体内药物浓度的测定主要有同位素标记法、HPLC等方法。同位素示踪检测法，具有灵敏度高、样品前处理简单、分析速度快等优点。尤其适用于体内药物浓度低、大批量样品的分析测试。不足之处是无法确认药物原形与其代谢产物。本文最初采用HPLC法进行体内样品的测试，预初实验发现灯盏乙素在血浆中的回收率不足20%，后试用同位素示踪法测定样品，结果符合本研究需要，因此本文选用同位素示踪法进行体内样品的分析检测。

本实验结果表明，灯盏花素伍用冰片经鼻给药，125I灯盏花素Tmax、Cmax分别为46.5 min、0.50μg/ml，绝对生物利用度为52.86%;单用灯盏花素经鼻给药组Tmax、Cmax分别为25.0 min、0.55μg/ml，绝对生物利用度为53.70%，均远高于口服给药，这可能与大鼠鼻黏膜面积大，药物可直接吸收入血、进入体循环，而口服给药具首过效应有关。

灯盏花素伍用冰片经鼻给药，冰片虽然延长了灯盏花素鼻腔给药在大鼠血浆中灯盏乙素的达峰时间，但对生物利用度影响较小。有文献报道[3]，大鼠灯盏花素伍用冰片静注给药后，灯盏乙素在大鼠体内的分布及消除均较单用组迅速，本研究与其不一致，另外该结果是否与冰片改变灯盏乙素在脑内的分布有关等，均有待进一步研究。

致谢：感谢复旦大学放射医学研究所的钟高仁和徐培康老师对本实验的热情帮助。

【参考文献】

[1] WU SR，CHENG G，HE YX，et al.Studies onthe efects of borneol on the distribution of rifampicin in mice[J].Chin Pharm，2004，39(4)：288291.

[2] 陈瑞玲.冰片对丙戊酸钠透过血脑屏障的影响[J].中国康复理论与实践，2007，13(2)：151153.

[3] 朱君荣.冰片对灯盏花素在大鼠体内药动学的影响[J].中国新药杂志，2007，16(22)：18761878.