幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备

田树伟,邵世和,韩军,黄河,黄世腾.幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备[J].江苏大学学报(医学版),2010,20(3):239-243

幽门螺杆菌,Ⅳ型分泌系统,cagM基因,抗体

田树伟,邵世和,韩军,黄河,黄世腾

2010年

知网,万方

目的： 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体，分析其抗原性并制备抗体。方法： 应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析，并构建表达载体pET28a(+)cagM,转化 E.coli BL21，IPTG诱导表达，SDSPAGE及鉴定表达蛋白，表达蛋白以 Ni2+NTA 柱进行纯化，用软件分析其抗原性后，免疫家兔制备多克隆抗体，ELISA检测多克隆抗体效价。结果： 测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568)，编码376个氨基酸，与基因库中已知菌株J99，26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%;诱导表达后经SDSPAGE检测表明，在43 700处发现一条新生条带，Ni2+NTA柱纯化后为单一条带，软件分析表明其抗原性较强，免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶1.6×105。结论: 首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因，并制备了其抗。