基于hxgprt-缺陷的弓形虫顶质体荧光突变株的构建

吴亮,姜旭淦,李礼,鞠爱萍,沈进,傅行礼,陈盛霞,周红.基于hxgprt-缺陷的弓形虫顶质体荧光突变株的构建[J].江苏大学学报(医学版),2012,22(1)

弓形虫,顶质体,突变株,绿色荧光蛋白

吴亮,姜旭淦,李礼,鞠爱萍,沈进,傅行礼,陈盛霞,周红

2012年

知网,万方

目的： 构建绿色荧光蛋白(green fluorescent protein， GFP)标记顶质体的弓形虫突变株，建立检测顶质体的简便方法。方法： 扩增顶质体酰基载体蛋白(acyl carrier protein， ACP)基因并构建转染载体pHX-ACP-GFP，转入弓形虫hxgprt-株速殖子，经霉酚酸和黄嘌呤筛选荧光突变株。激光共聚焦显微镜和蛋白质印迹技术检测突变株ACP-GFP融合蛋白的表达。结果： 通过霉酚酸和黄嘌呤筛选，可以在1周内获得突变株。激光共聚焦显微镜下观察到ACP-GFP融合蛋白聚集于顶质体，用抗GFP抗体能检测出ACP的转运肽型和成熟型蛋白。结论： 顶质体荧光突变株可清晰标记出顶质体的位置，借助GFP标签即可检测融合蛋白的表达。。