人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立

马学平,李丽,秦迎旭,高建炜,田涛.人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立[J].宁夏医学杂志,2010,32(3).

人体寄生细粒棘球蚴,基因组DNA提取,PCR-RAPD体系

马学平,李丽,秦迎旭,高建炜,田涛

2010年

知网,万方

目的 建立PCR-RAPD反应体系，提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA (RAPD)遗传多态性研究的稳定性，为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础。 方法 采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA，用单因素筛选方法建立PCR-RAPD分析体系。结果 采用改进的酚/氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高，适用于PCR-RAPD扩增分析;在25μL体系中，RAPD-PCR扩增反应各成分的最佳浓度为：dNTP 0.2-0.3 mmol/L、Taq酶 2.5U、随机引物 0.8-1.4μmol/L，模板为60ng。PCR扩增最佳条件为：95℃预变性5min;94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环;最后72℃延伸10min;初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物。结论 酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA，优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析。。