高效液相色谱法测定阿托伐他汀钙片中阿托伐他汀钙的含量

阿托伐他汀钙为他汀类血脂调节药,是3-羟基-3¨甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的选择性、竞争性抑制药,通过抑制肝脏内HMG-CoA还原酶和胆固醇的合成从而降低血浆中胆固醇和脂蛋白水平,并通过增加细胞表面的低密度脂蛋白(LDL)受体以增加LDL的摄取和代谢。用于原发性高胆固醇血症和混合性高脂血症,降低升高的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B及三酰甘油水平[1-2]。笔者参考部颁标准[3]、《美国药典》第“版原料药标准[4]及文献[5],采用高效液相色谱(HPLC)法,对本品的含量进行研究,方法专属性强,重复性好,准确度高,能有效地用于本品质量的控制。

1仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AD型高效液相色谱仪(日本岛津公司),包括工作站,LC-20AD泵,SIL-20A型自动进样器,SPD-M20A型二极管阵冽检测器(190~8OO nm);AUW220D型双量程分析天平(日本岛津公司,感量0.1mg/0·01mg);SCQ-250型超声波提取仪(上海申波超声公司)。

1.2 试药 阿托伐他汀钙对照品(中国食品药品检定研究院,批号:1005-2008,按无水阿托伐他汀钙计,供HPLC测定,含量为%.0%:供紫外分光光度法测定,含量为95.5%);阿托伐他汀钙原料药(浙江新东港药业股份有限公司,批号:⒛100701,含量:2%);阿托伐他汀钙片(湖北丝宝药业有限公司,批号:101001,110101,110102,110103,规格:每片10mg);阿托伐他汀钙片市售样品(辉瑞制药有限公司,批号:l11Q10);阿托伐他汀非对映异构体(购自美国药典委员会,批号:56);甲醇、乙腈(美国天地公司,色谱纯);其他试剂均为分析纯,水为新制多效纯化水。

2方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Apollo C1:(250mm×4.6mm,5um);流动相:醋酸铵缓冲液(称取醋酸铵l.54g,置1OO0mL水中,超声使溶解,用冰醋酸调节pH至4.5±0.05)-乙腈(60∶40);检测波长:z4nm;流速:1.1mL·min-1,柱温:40℃,进样量:20uL。

2.2溶液的制各

2.2.1对照品溶液精密称取阿托伐他汀钙对照品乃,翎mg(相当于阿托伐他汀23.42mg),置25mL棕色量瓶中,用N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品储各液。再精密量取2mL,置10mL棕色量瓶中,用N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.2系统适应性精密称取阿托伐他汀非对映异构体5。16mg,置10mL棕色量瓶中,用Ⅳ,llr二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度,摇匀。再精密量取非对映异构体、阿托伐他汀钙对照品储各液适量,用Ⅳ,Ar二甲基甲酰胺稀释制成每毫升含阿托伐他汀约0.2mg、含非对映异构体约2ug的溶液,摇匀,即得。

2.2.3供试品溶液取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(相当于阿托伐他汀50mg),置50mL量瓶,加Ⅳ,JV二甲基甲酰胺适量,超声使溶解,用Ⅳ,肛二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置10mL量瓶,加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀,即得。

2.2.4空白对照溶液按阿托伐他汀钙片处方制各不含阿托伐他汀钙的阴性样品,再按照供试品溶液的制各方法制各空白对照溶液。

2.3系统适应性实验按“2.1”项下色谱条件,精密量取阿托伐他汀钙对照品溶液、系统适应性溶液、供试品溶液、空白对照溶液各⒛uL进样,记录色谱图。对照品溶液色谱图中,阿托伐他汀主峰氵R为28:解min,理论板数为⒓贸3;系统适应性溶液色谱图中,非对映异构体峰莎R为%。绲min,与主峰分离度为2,h供试品溶液色谱图中,在与对照品溶液主峰色谱图相应的位置上,显相同的色谱峰;空白对照溶液色谱图在与对照品溶液主峰保留时间处无相应色谱峰,说明空白对照溶液无干扰。见图1。

2.4定量限考察精密量取“2.2.1”项下对照品溶液适量,加N,N¨二甲基甲酰胺稀释,按“2.1”项下色谱条件进样测定,当主峰的响应值约为噪音水平的10倍时,其定量限为3,532ng。25线性关系考察精密量取“2.2.1”项下对照品储各液0.5,112,3,5,10mL,分别置10mL棕色量瓶中,用N,N一二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀,作为对照品系列溶液。分别取上述溶液各⒛uL进样,记录色谱图,以峰面积(A)对浓度(C)绘制标准曲线。阿托伐他汀

2.6仪器精密度实验精密量取“2.2.1”项下的对照品溶液,连续进样5次,测得阿托伐他汀钙峰面积的RSD为,即仪器精密度良好。

2.7精密度实验

2.7.1重复性取批号为101001供试品6份,按照“2.2.3”项下方法平行处理供试品并测定,结果阿托伐他汀钙标示量平均98,⒛%(r=6),RSD为0.41%,重复性良好。

2.7.2中间精密度实验在不同时间由3个不同的分析人员用不同的高效液相色谱仪(Aent11Q0),按照重复性实验各制各2份供试品溶液,按照上述色谱条件,测定峰面积,测得阿托伐他汀钙平均百分含量98,35%(n=6),RsD为0.91%。

2.8供试品溶液的稳定性实验取“2.2.3”项下的供试品溶液1份,于室温(20~笏℃)下放置,在不同时间段(0,2,4,6,8,10,12h)分别定点进样测定,测得阿托伐他汀钙峰面积的RSD为0。∞%(瓦=7),说明供试品溶液在12h内含量保持稳定。

2.9范围照供试品取样量的SO%为低浓度,供试晶取样量的120%为高浓度,按照“2.2.3”项方法分别制各3份供试品溶液,精密量取⒛uL进样,测定峰面积,测得阿托伐他汀钙平均百分含量,RSD为0.32%。

2.10加样回收率实验取已知含量的阿托伐他汀钙片(批号:101O01)粉末9份,每份约0,5g,即为“2.2.3”项下供试品取样量的一半,精密称定,置∞mL棕色量瓶中,分别精密添加阿托伐他汀钙原料,3O mg,各3份,混合均匀后分别制成含阿托伐他汀⒛%,I00%与1⒛%的模拟样品,再按“2.2.3”项方法制备供试品溶液。测定其含量并计算回收率,结果阿托伐他汀钙平均回收率100.锶%,RSD=0.78%,见表1。

2.11样品含量测定取不同批号的阿托伐他汀钙片及市售样品,按“2,2.3”项下方法制各供试品溶液,测定其阿托伐他汀钙的含量,结果见表2。

3讨论

3.1流动相的筛选阿托伐他汀为多取代的吡咯衍生物,具亲脂性,在甲醇中易溶,在水中极微溶解,结构中含有2个羟基的羧酸侧链,故显弱酸性。参考标准及文献[35]色谱条件,均选用醋酸铵或枸橼酸铵¨乙腈ˉ四氢呋喃作为流动相,流动相中加入弱酸性缓冲液,以抑制阿托伐他汀的解离,使其以分子形式存在,增强其保留值;加人四氢呋喃,可改善阿托伐化汀峰型,但本实验中,四氢呋喃易引起基线噪音,基线漂移较严重。研究发现醋酸盐缓冲液的浓度对主成分峰及各杂质峰之间分离度无明显影响,故本实验将流动相进行适当调整,选用醋酸盐缓冲液(称取醋酸铵1弘g,加水溶解并稀释至10OO mL,用冰醋酸调节pH至4.50±0.55)乙腈(60∶40)作为流动相。

3.2检测波长的选择实验选用的检测器为二极管阵列检测器,选择在⒛0~碉0nm查看光谱图,在阿托伐他汀相对应保留时间处查看光谱图可知,阿托伐他汀在⒛4nm波长处具有最大吸收。且其非对映异构体最大吸收峰为叨4nm,故选择z4nm作为本实验的紫外检测波长。

 参考文献：

[1]陈新谦,金有豫,汤光. 新编药物学[M].北京:人民卫生出版社,2011.420.

[2]赵冰. 阿托伐他汀的临床研究进展[J].中国药房,2010,(24):2303-2304.

[3]国家食品药品监督管理局. 国家药品标准新药转正标准.第36册(西药部分)[S].

[4]The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia[M].Maryland:United States Pharmacopeia,2011.1949-1951.

[5]李文莉,钟庆元,文庆. HPLC法测定阿托伐他汀钙胶囊的含量及有关物质[J].药物分析杂志,2007,(02):267-269.