高效液相色谱法测定肌氨肽苷注射液中次黄嘌呤的含量

肌氨肽苷注射液具有促进机体代谢作用，用于肌肉萎缩、神经性水肿、脑血管意外性瘫痪、神经衰弱综合症等。主要活性物质为多肽和次黄嘌呤，为了有效的控制产品的质量，我们建立了用高效液相色谱测定肌氨肽苷注射液的含量测定方法。此方法具有分离效果好，操作简便，灵敏度高，精密度好等特点。

1　仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪(SPD-10AVP型可见-紫外检测器;LC-10ATVP溶剂输液泵)(日本岛津);次黄嘌呤对照品(含量测定用，中国生物制品检定所);肌氨肽苷注射液(公司自制);甲醇和磷酸二氢钾均为色谱纯，水为公司自制。

2　方法和结果

2.1　色谱条件

色谱柱：YMC C18柱(250mm×4.6mm,5um);流动相：磷酸二氢钾(0.01mol/L)-甲醇(100：0.2)为流动相，检测波长260nm，理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000，次黄嘌呤峰与黄嘌呤峰的分离度应符合要求。

2.2　溶液的制备

对照品溶液的制备 取次黄嘌呤对照品适量，加水制成每1ml中含10μg 的溶液作为对照品溶液。另取次黄嘌呤与黄嘌呤适量加水制成每1ml中含次黄嘌呤25μg及黄嘌呤2.5μg的溶液作为系统适应性试验用溶液。

供试品溶液的制备 取本品，加水适量制成每1ml中含次黄嘌呤10μg的溶液，作为供试品溶液。

2.3　色谱条件与系统适应性试验

精密称取次黄嘌呤、黄嘌呤适量，加水溶解并定容至100ml，制成每1ml中含次黄嘌呤25.3μg、含黄嘌呤10.8μg的溶液作为系统适应性试验用溶液。

取系统适应性试验用溶液各20μl，进样，结果为：色谱柱理论塔板按次黄嘌呤计算：n=5.54(tR/W2/h)2=5.54×(56.3÷1.8)2=5419 > 5000分离度：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)=2×5.5÷(2.7+3.1)=1.89>1.5由计算结果知：本系统理论塔板数(按次黄嘌呤计算)以及次黄嘌呤与黄嘌呤峰的分离度符合要求。

2.4　线性关系试验

精密称取次黄嘌呤对照品适量，加水制成每1ml中约含次黄嘌呤20μg的溶液，精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，按含量测定法测定，以加入次黄嘌呤的量为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程：y = 50244+280761x r=0.995 (n=5)，说明次黄嘌呤在4.0～ 20.0μg/ml之间有良好线性。

2.5　精密度试验

精密吸取同一对照品溶液20μl，连续进样6次，注入色谱仪中，用外标法，按峰面积计算次黄嘌呤含量，结果各次测得峰面积的RSD为1.34%(n=6)，次黄嘌呤含量测定的精密度试验符合测定要求。

2.6　重复性试验

分别精密称取同一批号的样品6份，按照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，精密量取供试品和对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，结果RSD为1.15%，说明该测定方法重复性良好。

2.7　准确度试验

精密称取次黄嘌呤对照品适量，加水溶解并定容，制成每1ml含10.070μg的溶液作为对照品溶液，另取样品10瓶，加水定容至10ml容量瓶中(经检测，该溶液次黄嘌呤含量为0.9947mg/ml)，备用，精密量取该溶液3份，每份1.0ml，每份各加入一定量配制浓度为2.005mg/ml的次黄嘌呤溶液，再各加水定容至 100ml作为供试品溶液，取各供试品溶液，按含量测定法测定次黄嘌呤含量，每种浓度重复测定3次，计算回收率。结果次黄嘌呤含量测定平均回收率为：100.56%，RSD=1.57%，准确度试验符合检测要求。

2.8　供试品次黄嘌呤含量测定

取三批供试品样品1 、样品2 、样品3按照上述条件与方法测定，结果见表1：表1　样品次黄嘌呤含量测定结果

3　讨论

利用高效液相色谱法可测定肌氨肽苷注射液中次黄嘌呤的含量，且该方法简便，准确，灵敏度高，可以有效的控制该产品的质量。